當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>RNA/DNA提取>> 2μg質(zhì)粒pEGFP-N1
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:質(zhì)粒pEGFP-N1
產(chǎn)品分類:RNA/DNA提取試劑盒
貨號:CP100413
產(chǎn)品規(guī)格:2μg
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
新布尼亞病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Nicorandil651416尼可地爾
麻疹病毒/風(fēng)疹病毒雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Dronedarone 1416253鹽酸決奈達隆
東部/西部/委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒三重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Bisoprolol fumarate43443富馬酸比索洛爾
登革熱Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ病毒四重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒484-[2-[(3-Ethyl-methyl-oxo-pyrrolin-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide11189
小反芻獸疫病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Minoxidil3841米諾地爾
蔗糖0酸合成酶(SPS)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 Withanolide S 中文名:醉茄內(nèi)酯S 分子式:C28H40O8
札如病毒(SV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Withaphysalin A 中文名: 分子式:C28H34O6 度:98.0%
增殖誘導(dǎo)配體 (APRIL) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 Ampicillin Trihydrate 中文名:氨芐西林三水酸 分子式:C16H19N3O4S
增殖誘導(dǎo)配體 英文名稱: a proliferation-inducing ligand 英文縮寫: APRIL 規(guī)格: 48T/96T Norandrostenedione 734-32-7 中文名:19-去甲-4-雄烯二酮 分子式:C18H24O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
增殖誘導(dǎo)配體 英文名稱: a proliferation-inducing ligand 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: APRIL Withaphysalin E 中文名: 分子式:C28H34O7 度:97.0%
質(zhì)粒pEGFP-N1萊苞迪甙D HPLC≥98% 10mg 小鼠脂肪酸合成酶(FASN)ELISA試劑盒 ,英文名: FASN ELISA Kit
萊菔素 HPLC≥98% 20mg 小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA檢測試劑盒MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T
藍萼甲素 HPLC≥98% 20mg 人聚集蛋白(Agrin)試劑盒 Human Agrin ELISA Kit
欖香酮酸 HPLC≥98% 20mg Ratadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit大鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
莨菪堿 HPLC≥98% 20mg 載玻片細胞TSH-BETA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
老鸛草素 HPLC≥98% 20mg Mouse25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
酪醇 HPLC≥98% 20mg 小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒 ,英文名: FAS ELISA Kit
雷酚內(nèi)酯 HPLC≥99% 20mg 牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T
雷公藤春堿 HPLC≥98% 10mg 人AFG3樣蛋白2(AFG3L2)試劑盒 Human AFG3L2 ELISA kit
雷公藤堿 HPLC≥98% 10mg 英文名稱Mouse(IL-1sRI)ELISAkit小鼠白介素1可溶性受體I(IL-1sRI)規(guī)格:96T/48T
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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