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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>RNA/DNA提取>> HEPES Buffer(HEPES緩沖液)

HEPES Buffer(HEPES緩沖液)

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-08-02 13:42:20瀏覽次數(shù):102次

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HEPES Buffer(HEPES緩沖液)客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。

具有下列特點:
1.
即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2.
引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix
中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4.
提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。

產(chǎn)品名稱

HEPES BufferHEPES緩沖液)

規(guī)格

詳見說明

貨號

CP100691

PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93-94)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

特點優(yōu)勢:
1.
特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2.   
重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%
3.   
靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4.   
實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5.   
優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   
優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
引物擴(kuò)增跨度: 200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.11umol10100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
Triton X00 曲拉通X00   0ml Oxytetracycline 586鹽酸土霉素

Trypan Blue 臺盼藍(lán);曲利苯藍(lán);直接藍(lán)14   5g/Flumequine428355氟甲喹

Tryptone 胰蛋白胨   0g Valnemulin 1338686鹽酸沃尼妙林

TTC 氯化三苯四氮唑   5g/2-Chloromethyl-methyl-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine 127337-

Tween0 吐溫0   0ml Rizatriptan benzoate14526苯甲酸利扎曲坦
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9   英文名稱:   maix metalloproteinase 9   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   MMP-9  Diphenhydramine   147-24-0  中文名:鹽酸苯海拉明  分子式:C17H22ClNO  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒     D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名:  分子式:C12H22O6  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒              D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名:  分子式:C12H22O6 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒     DL-2-Amino-n-octanoic acid  中文名:DL-2-氨基正辛酸  分子式:C8H17NO2  度:98.0%

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3(mouse MMP-3)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  Dioxopromethazine   15374-15-9  中文名:鹽酸二氧丙嗪  分子式:C17H21ClN2O2S  度:99.0%
HEPES Buffer
HEPES緩沖液)阿侖鈉  Alendronate   質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 動物肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒5

別嘌醇  Allopurinol  質(zhì)量規(guī)格:>99%, Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISA試劑盒大鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

別嘌醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Allopurinol  質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ()ELISA試劑盒 ,英文名:  ELISA Kit

烯丙基雌醇;烯丙雌醇  Allylestrenol  質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0% 兔血栓素B2(TXB2)ELISA檢測試劑盒RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 96T/48T

烯丙基雌醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Allylestrenol  質(zhì)量規(guī)格:HPLC97.0%,標(biāo)準(zhǔn)品 牛肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II(CPT-II)試劑盒 Bovine carnitine palmitoylansferase II,CPT-II ELISA kit

前列地爾,前列腺素E1  Alprostadil,PGE1,  質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,USP30 英文名稱HumanCKMBELISAKit人激動異構(gòu)酶MB(CKMB)規(guī)格:96T/48T

四烯雌酮,烯丙孕素  Altrenogest  質(zhì)量規(guī)格:> 99% 動物肝組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10

四烯雌酮,烯丙孕素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Altrenogest  質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISA試劑盒大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

鹽酸金剛烷胺  Amantadine HCl  質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 小鼠脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒 ,英文名: DPD ELISA Kit

鹽酸金剛烷胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Amantadine HCl  質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA檢測試劑盒MouseGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit 96T/48T
熒光定量PCR實驗步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
兩相分離 1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。


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