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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>RNA/DNA提取>> MES Buffer(MES緩沖液)
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | MES Buffer(MES緩沖液) |
規(guī)格 | 詳見說明 |
貨號(hào) | CP100725 |
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
pcomb3展示系統(tǒng)套(3組分)/盒Glyburide2381格列本脲
表達(dá)性宿主菌XL1-Blue0 ul/支Gliquidone333425格列喹酮
輔助噬菌體VCSM130 ul/支Glimepiride934797格列美脲
噬菌粒pcomb3HSSng/ul,ulGliclazide211878格列齊特
pcomb3HSS展示系統(tǒng)套(3組分)/盒Glaucogenin C mono-D-thevetoside84914
小鼠谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒 Deferasirox 201530-41-8 中文名:地拉羅司 分子式:C21H15N3O4
小鼠谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISAKit Deflazacort 中文名:地夫可特 分子式:C25H31NO6 度:98.0%
小鼠谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)ELISA試劑盒 Deferasirox 中文名:地拉羅司 分子式:C21H15N3O4 度:99.0%
小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒 Deferasirox 中文名:地拉羅司 分子式:C21H15N3O4
小鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒 Deferasirox 201530-41-8 中文名:地拉羅司 分子式:C21H15N3O4 度:99.0%
MES Buffer(MES緩沖液)鏈脲佐菌素(標(biāo)準(zhǔn)品) Streptozocin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人骨橋素(OPN)試劑盒 Human Osteopoin,OPN ELISA Kit
硝酸硫康唑 Sulconazle Nitrate 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,JP2002 RatFibronectin,FNELISAKit大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硝酸硫康唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulconazle Nitrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 96孔板細(xì)胞基因組DNA分離試劑盒10
舒尼替尼堿 Sunitinib base 質(zhì)量規(guī)格:>98.5% MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISA試劑盒小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
舒尼替尼堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Sunitinib base 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒 ,英文名: CDT ELISA Kit
蘋果酸舒尼替尼 Sunitinib Malate 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR 小鼠白介素-5(IL-5)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseIerleukin5,IL-5ELISAKIT 96T/48T
蘋果酸舒尼替尼(標(biāo)準(zhǔn)品) Sunitinib Malate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人骨膜蛋白/成骨細(xì)胞特異性因子2(POSTN)試劑盒 Human periostin/osteoblast specific factor 2,POSTN ELISA kit
舒洛芬 Suprofen 質(zhì)量規(guī)格:>98% RatFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
他克莫司 Tacrolimus /FK506 monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) A.fumigatusRFLP基因分析試劑盒20
他克莫司(標(biāo)準(zhǔn)品) Tacrolimus /FK506 monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISA試劑盒小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
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