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具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 病毒沉淀劑 |
規(guī)格 | 詳見說明 |
貨號 | CP100717 |
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
PNPP 4-磷酸二鈉 1g/5g Antipyrine0安替比林
Ponceau S 麗春紅S;猩紅S gTiamulin552975泰妙菌素
Propidium Iodide 碘化丙啶 25mgSulfadiazine685磺胺嘧啶
PVP聚乙烯酮 0g Rifampicin132926利福平
PVPP聚乙烯聚酮 0g Dyphylline4798二羥丙茶堿
小鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit Deoxylapachol 中文名: 分子式:C15H14O2 度:97.0%
小鼠骨橋素elisa試劑盒 小鼠骨橋素試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠骨橋素試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠骨橋素試劑盒、小鼠骨橋素eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Dorzolomide 130693-82-2 中文名:鹽酸多佐胺 分子式:C10H17ClN2O4S3
小鼠骨橋素(OPN)ELISAKit Benzanthrone 中文名:苯并蒽酮 分子式:C17H10O
小鼠骨橋素(mouse OPN) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Imidazo[1,2-b]pyridazine 766-55-2 中文名: 分子式:C6H5N3
小鼠骨橋蛋白 ( mouse Osteopoin) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 德國 IBL Ilaprazole 中文名:艾普拉唑 分子式:C19H18N4O2S
病毒沉淀劑鹽酸昂丹司瓊 Ondansetron HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠天冬酸轉(zhuǎn)酶(AST)ELISA試劑盒 ,英文名: AST ELISA Kit
鹽酸昂丹司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品) Ondansetron HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 豚鼠血清(NO)ELISA檢測試劑盒guineapigniicoxide,NOELISAKit 96T/48T
奧硝唑 Ornidazole 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 牛內(nèi)皮型合成酶(eNOS)試劑盒 Bovine Endothelial niic oxide syhase,eNOS ELISA Kit
奧硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Ornidazole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱Human-TELISAKit人肌鈣蛋白-T(Tn-T)規(guī)格:96T/48T
奧沙利鉑 Oxaliplatin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,細(xì)胞培養(yǎng)級 動物軟組織線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒20
奧沙利鉑(標(biāo)準(zhǔn)品) Oxaliplatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatP-SelectinELISA試劑盒大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硝酸奧昔康唑 Oxiconazole Nitrate 質(zhì)量規(guī)格:度>99% 小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 ,英文名: AST ELISA Kit
鹽酸土霉素 Oxytetracycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 小鼠白介素18(IL-18)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit 96T/48T
鹽酸土霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Oxytetracycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:效價測定 人骨涎蛋白(BSP)試劑盒 Human bone sialoprotein,BSP ELISA Kit
縮宮素,醋酸催產(chǎn)素 Oxytocin Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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