PCR實驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

1M Tris pH8.ml3-Amino-phenyl-propanol1459343-氨基-苯基-丙醇

1M Tris pH8.ml3-Amino-naphthoic acid595923-氨基-萘甲酸

1M Tris-HCl, pH 6.ml3-Amino,6-piperidinedione 246666

2，4-D溶液（2，4-D）5×1ml3-Amino-phenyl-pyrazolin-one4149/6/83-氨基-苯基-吡唑啉-酮

2,4-表油菜素內(nèi)酯溶液(EBR) 5×1ml3-Allylrhodanine145773-烯丙基羅丹寧
酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣  Atracurium oxalate  64228-78-0  中文名：阿曲庫胺草酸鹽  分子式：C53H68N2O16  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

?；D(zhuǎn)移酶（AAT）試劑盒   可見分光光度法   10管/9樣              Vilazodone   163521-08-2  中文名：鹽酸維拉唑酮  分子式：C26H28ClN5O2 

?；D(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Atractylodin  55290-63-6  中文名：蒼術(shù)素  分子式：C13H10O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 抗真菌; 蒼術(shù)屬; 聚乙炔; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒   可見分光光度法   10管/9樣              α-Tocopherolquinone  7559/4/8  中文名：  分子式：C29H50O3 

酰基輔酶A氧化酶   英文名稱：   Mouse Acyl-CoA oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACO  Decoquinate  18507-89-6  中文名：癸氧喹酯  分子式：C24H35NO5
DNA Shuffling試劑盒Bacto酵母浸粉(BD原裝)  Yeast extract  質(zhì)量規(guī)格：Bacto;BD212750 英文名稱HumanCTX-IELISAKit人I型膠原C端肽規(guī)格：96T/48T

無水碳酸鈉   carbonate anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：AR,≥99.8% 動物組織同還原酶1E(aldo-ketoreductase1E)活性比色法定量檢測試劑盒20

D-果糖  D-Fructose  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR ELISAKitLebtospira兔鉤端螺旋體IgG規(guī)格：48T/96T

核黃素鈉水合物  Riboflavin 5'-monophosphate  salt hydrate  質(zhì)量規(guī)格：核黃素73.0 ~79.0% 小鼠葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)ELISA試劑盒 ，英文名： GPI ELISA Kit

化乙錠溶液，10 mg/ml  EB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人合成酶(NOS)ELISA檢測試劑盒Humanniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T

核苷酸膠體染料  Green-DNA Dye,SYBR Green I  質(zhì)量規(guī)格：BR 大鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)試劑盒 Rat mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit

D-葡萄糖無水  D-Glucose  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,分子生物學(xué)級 英文名稱Humangp130solublefragmeELISAKIT人gp130規(guī)格：96T/48T

咪唑  Imidazole  質(zhì)量規(guī)格：AR 動物組織石蠟切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIANBLUE)染色試劑盒50

L(+)-阿拉伯糖  L(+)-Arabinose  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitCA兔兒茶酚胺規(guī)格：48T/96T

去離子甲酰胺  Formamide deionized  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級 小鼠葡萄糖60酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒 ，英文名： G6PD ELISA Kit