當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光定量PCR>> 50次非洲豬瘟染料法熒光定量PCR試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:非洲豬瘟染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光定量PCR
貨號:CP100995
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
無毒型核酸染色劑質(zhì)量規(guī)格:BR4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green ELISAKitβ-HCG人絨毛膜促性腺激素β規(guī)格:48T/96T 大鼠二酸單酰輔酶A脫羧酶(MLYCD)試劑盒 Rat Malonyl Coenzyme A Decarboxylase,MLYCD ELISA Kit
5,5-二-1,3-環(huán)己二酮質(zhì)量規(guī)格:BR5,5-Dimethyl-1,3-cyclohexanedione 小鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-2 ELISA Kit CLIAKitfoLa(Humahymus-leukemiaaigen)ELISAKit人胸腺白血病抗原規(guī)格:48T/96T
5-氟胞苷(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR5-Fluorocytidine 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA檢測試劑盒Rateosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 96T/48T 全組織組織化學AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測試劑盒(含AP一抗)10
4-傘形酮-β-D-木糖苷質(zhì)量規(guī)格:0.994-Methylumbelliferyl-β-D-xylopyranoside Printable Reviews 人TH糖蛋白(THP)試劑盒 Human THP ELISA Kit ELISAKitA人抗凝血酶受體規(guī)格:48T/96T
十五氟辛酸(約5mmol)[離子對色譜級]質(zhì)量規(guī)格:用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對試劑IPC-PFFA-8 (ca. 5mmol) 大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA檢測試劑盒Ratnuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 96T/48T HumanB-LymphocyteChemoatacta1,BLC-1ELISA試劑盒人B-細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
十五氟辛酸,高等級[離子對色譜級]質(zhì)量規(guī)格:用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對試劑IPC-PFFA-8 HG 人白介素2受體(IL2R)試劑盒 Human ierleukin-2 receptor,IL2R ELISA kit HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISAKit人環(huán)1酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
9,10-二甲氧基蒽-2-磺酸鈉鹽[離子對色譜級]質(zhì)量規(guī)格:用于氨類的熒光離子對試劑IPA-DAS 英文名稱HumanFree-T3ELISAKit游離狀腺原氨酸(Free-T3)規(guī)格:96T/48T 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
敵草隆(標準品)質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.5%Diuron PARP(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克 山羊前列腺素E2(PGE2)試劑盒 Goat prostaglandin E2,PGE2 ELISA kit
非洲豬瘟染料法熒光定量PCR試劑盒戊型肝炎病毒(HEV)熒光-PCR法檢測試劑盒
腦心肌炎病毒(EMCV)熒光-PCR法檢測試劑盒
豬流感(SIV)熒光-PCR法檢測試劑盒
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
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