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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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人胚腎細(xì)胞;293T操作步驟

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更新時(shí)間:2017-05-16 14:36:13瀏覽次數(shù):217次

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細(xì)胞名稱(chēng)      人胚腎細(xì)胞;293T操作步驟
形態(tài)特性       上皮樣
生長(zhǎng)特性      貼壁
特征特性       該細(xì)胞由293tsA1609neo衍生而來(lái),含有SV40大T抗原,用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白生產(chǎn)。 
培養(yǎng)條件        10%FBS,2mM L-glutamine,1% Penicillin/Streptomycin.
傳代方法       1:3-1:8,每周換液2-3次
傳代情況      
凍存條件       90%FBS+10%DMSO
支原體檢測(cè)      培養(yǎng)法(-)指示細(xì)胞法(-)
STR       Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:12,14;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D21S11:28,30.2;D3S1358:15,16,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;PentaD:9,10;PentaE:7,15;TH01:7,9.3;TPOX:11;VWA:16,19
同工酶      
染色體      
使用權(quán)限      A類(lèi) 
人胚腎細(xì)胞;293T操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源, 所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
人胚腎細(xì)胞;293T操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞株種類(lèi)齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專(zhuān)業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
游離原卟啉(FEP)ELISA試劑盒    ,英文名:    FEP ELISA Kit
游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA試劑盒    ,英文名:    f-Hb ELISA Kit
游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒    ,英文名:    Free-T3 ELISA Kit
游離肉堿(Free Carnitine)ELISA試劑盒    ,英文名:    Free Carnitine ELISA Kit
游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒    ,英文名:    fPSA ELISA Kit
游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒    ,英文名:    FT4 ELISA Kit
游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒    ,英文名:    F-TESTO ELISA Kit
游離蛋白S(FP-S)ELISA試劑盒    ,英文名:    FP-S ELISA Kit
游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒    ,英文名:    FE3 ELISA Kit
游離β絨毛膜促性腺激素(f-βhCG)ELISA試劑盒    ,英文名:    f-βhCG ELISA Kit
幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒    ,英文名:    Hp-IgG ELISA Kit
幽門(mén)螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒    ,英文名:    Hp-IgM ELISA Kit
幽門(mén)螺桿菌細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒    ,英文名:    HP-CagA-IgG ELISA Kit
優(yōu)球蛋白(EL)ELISA試劑盒    ,英文名:    EL ELISA Kit
硬骨素(SOST)ELISA試劑盒    ,英文名:    SOST ELISA Kit
印度刺猬因子(IHH)ELISA試劑盒    ,英文名:    IHH ELISA Kit

車(chē)葉草Asperula    Asperuloside    車(chē)葉草苷    14259-45-1    C18H22O11    ≥98%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Aliarin    5,7-二羥基-2-[4-羥基-3-(4-羥基-3-甲基丁基)苯基]-3,6-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮    84294-77-9    C22H24O8    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    3,5-Diprenyl-4-hydroxybenzaldehyde    4-羥基-3,5-雙(3-甲基-2-丁烯-1-基)苯甲醛    52275-04-4    C17H22O2    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    3,6-Dimethoxyapigenin    5,7,4'-三羥基-3,6-二甲氧基黃酮    22697-65-0    C17H14O7    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Dodonolide    (6R,7S,8E,10Z)-7-[2-(3-呋喃基)乙基]-4,5,6,7-四氫-6,7-二甲基環(huán)癸并[c]呋喃-1(3H)-酮    349534-73-2    C20H24O3    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Dodoviscin A    none    1372527-25-7    C27H32O9    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Dodoviscin H    (-)-5,7-二羥基-2-[4-羥基-3-(4-羥基-3-甲基丁基)-5-(3-甲基-2-丁烯-1-基)苯基]-3-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮    1372527-39-3    人胚腎細(xì)胞;293T操作步驟C26H30O7    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Dodoviscin I     (+)-5,7-二羥基-2-[4-羥基-3-(4-羥基-3-甲基丁基)苯基]-3-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮    1372527-40-6    C21H22O7    ≥95%
車(chē)桑子Dodonaea viscosa    Hautriwaic acid    車(chē)桑子酸    18411-75-1    C20H28O4    ≥95%

 

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