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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

PAPP-A 人妊相關血漿蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 SP1/PSβ1-G 人妊特異性β1糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 HG 人妊皰疹抗體 規(guī)格： 48T/96T

 HSF-1 人熱休克因子1 規(guī)格： 48T/96T

 HSP gp96 人熱休克蛋白糖蛋白96 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-90 人熱休克蛋白90 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-70 人熱休克蛋白70 規(guī)格： 48T/96T

 Hsp-60 人熱休克蛋白60 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-40 人熱休克蛋白40 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-27 人熱休克蛋白27 規(guī)格： 48T/96T

 HSP-20 人熱休克蛋白20 規(guī)格： 48T/96T

 IMA 人缺血修飾白蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 ALD 人醛縮酶 規(guī)格： 48T/96T

 ALD 人醛固酮 規(guī)格： 48T/96T

 i-PTH 人全段甲狀旁腺素 規(guī)格： 48T/96T

 ASGPR 人去唾液酸糖蛋白受體 規(guī)格： 48T/96T

 NA 人* 規(guī)格： 48T/96T

 FK 人趨化因子 規(guī)格： 48T/96T

鄰甲基苯甲酸 118-90-1

鄰氨甲酸 118-92-3

XL2-Blue 感受態(tài)細胞 100ul*502'-羥基苯乙酮 118-93-4

氯磺酰異氰酸酯 1189-71-5

環(huán)丁酮 1191-95-3

2,3-二氫呋喃 1191-99-7

1-甲基-5-氨基吡唑 1192-21-8

2-溴甲基四氫 1192-30-9

2-乙?；秽?1192-62-7

2,4-二硝基苯肼 119-26-6

4-氨基苯硫酚 1193-02-8

4,6-二氯嘧啶 1193-21-1

4-甲基-3-硝基苯胺 119-32-4

4,6-二羥基嘧啶 1193-24-4

* 119-36-8

對氟苯腈 1194-02-1

二苯甲酮 119-61-9

1,2,3,4-四氫萘 119-64-2

異喹啉 119-65-3

吲哚-6-甲醛 1196-70-9

鄰羧基環(huán)己醇 119-67-5

對氨基并咪唑 1197-55-3

5-溴-8-羥基喹啉 1198-14-7

S-3-氨基奎寧環(huán)胺鹽酸鹽 119904-90-4

對溴肉桂酸 1200-07-3

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。