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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

 OPG 大鼠骨保護(hù)素 規(guī)格： 48T/96T

 GAD-Ab 大鼠*脫羧酶自身抗體 規(guī)格： 48T/96T

 OFQ/N 大鼠孤腓肽 規(guī)格： 48T/96T

 Lebtospira 大鼠鉤端螺旋體IgG 規(guī)格： 48T/96T

 T 大鼠睪酮 規(guī)格： 48T/96T

 u-T4 大鼠高敏甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T

 U-TSH 大鼠高靈敏度促甲狀腺激素 規(guī)格： 48T/96T

 HGF 大鼠肝細(xì)胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 SCFR 大鼠干細(xì)胞因子受體 規(guī)格： 48T/96T

 SCF/MGF 大鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 IP-10/CXCL10 大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10 規(guī)格： 48T/96T

 CR 大鼠鈣結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CAM 大鼠鈣調(diào)素 規(guī)格： 48T/96T

 CaN 大鼠鈣調(diào)磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

 CAMK 2 大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2 規(guī)格： 48T/96T

 CPSA 大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T

 sIgA 大鼠分泌型免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 SP-A 大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 DPPⅣ 大鼠二肽基肽酶Ⅳ 規(guī)格： 48T/96T

 CA 大鼠兒茶酚胺 規(guī)格： 48T/96T

 DAT 大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 D2R 大鼠多巴胺D2受體 規(guī)格： 48T/96T

 D1R 大鼠多巴胺D1受體 規(guī)格： 48T/96T

 D1R 大鼠多巴胺D1受體 規(guī)格： 48T/96T

 DA 大鼠多巴胺 規(guī)格： 48T/96T

 TE 大鼠端粒酶 規(guī)格： 48T/96T

 M-AChR 大鼠毒蕈堿型乙酰*受體 規(guī)格： 48T/96T

 AZT 大鼠* 規(guī)格： 48T/96T

 AIF 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子 規(guī)格：

3-氨基-2-甲基吡啶 3430-10-2

5-溴-2-甲基吡啶 3430-13-5

3-氨基-6-甲基吡啶 3430-14-6

3-溴-5-甲基吡啶 3430-16-8

2-溴-3-甲基吡啶 3430-17-9

2,5-二溴-3-甲基吡啶 3430-18-0

3-氨基-5-甲基吡啶 3430-19-1

4-甲基-3-溴吡啶 3430-22-6

3,5-二溴-4-甲基吡啶 3430-23-7

3-氨基-4-甲基吡啶 3430-27-1

3-氯-4-氟環(huán)己醇 34328-61-5

2-哌啶甲醇 3433-37-2

S-叔丁基亞磺酰胺 343338-28-3

2-溴溴芐 3433-80-5

D-* 344-25-2

5-溴-2-硝基三氟甲苯 344-38-7

2-氯-3-硝基吡啶 34515-82-7

5-溴茚酮 34598-49-7

2,5-二溴硝基苯 3460-18-2

4-溴苯甲砜 3466-32-8

2,7-二甲氧基萘 3469-26-9

4-碘吡唑 3469-69-0

6-羥基-1-四氫萘酮 3470-50-6

JM109 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*20醋酸甲脒 3473-63-0

2-氟苯胺 348-54-9

3,4-二氟溴苯 348-61-8

碳酸鋅 3486-35-9

8T/96T

注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。