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更新時間:2019-09-20 14:56:28瀏覽次數(shù):176次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)DH5α 感受態(tài)細胞100ul*100-生命科學儀器
DH5α 感受態(tài)細胞100ul*20-生命科學儀器
JM109 感受態(tài)細胞 100ul*20-生命科學儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細胞 100ul*100-生命科學儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細胞 100ul*20-生命科學儀器
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產(chǎn)品名稱 | Stbl2 感受態(tài)細胞 100ul*10 |
包裝 | 100ul*10 |
分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
2-氟苯硫酚 2557-78-0
去甲托品酮鹽酸鹽 25602-68-0
9-苯基-9-芴醇 25603-67-2
2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物 2564-83-2
2-溴乙胺氫鹽 2576-47-8
* 25812-30-0
順式-4-羥基-D-* 2584-71-6
氰基硼鈉 25895-60-7
哌啶-1-甲醛 2591-86-8
1-羥基苯并三唑 2592-95-2
Stbl2 感受態(tài)細胞 100ul*101-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽 25952-53-8
甲氧甲?;鶃喖谆交?2605-67-6
5-溴-2-二甲基氨基吡啶 26163-07-5
6-溴-2-吡啶甲酸甲酯 26218-75-7
4-溴丁酸 2623-87-2
D-2-氨基丁酸 2623-91-8
D-2-氨基丁酸 2623-91-8?
N-Boc-L-哌啶-2-羧酸 26250-84-0
S-1-* 2627-86-3
4-吡啶丙醇 2629-72-3
氯鉻酸吡啶鹽 26299-14-9
L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽 26348-70-9
4-溴-1,2-亞甲二氧基苯 2635-13-4
疊氮磷酸二苯酯 2638
Gzms-B 人顆粒酶B 規(guī)格: 48T/96T
Gzms-A 人顆粒酶A 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgM 人柯薩奇病毒IgM 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgG 人柯薩奇病毒IgG 規(guī)格: 48T/96T
AHA 人抗組蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
H2A-H2B 人抗組蛋白 規(guī)格: 48T/96T
EMAb 人抗子宮內(nèi)膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
ATA 人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACA/CENP 人抗著絲點抗體 規(guī)格: 48T/96T
ANGA 人抗中性粒細胞顆??贵w 規(guī)格: 48T/96T
ANA 人抗中性粒細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
pANCA 人抗中性粒細胞核周抗體 規(guī)格: 48T/96T
cANCA 人抗中性粒細胞胞漿抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACA 人抗中性粒/中心體抗體 規(guī)格: 48T/96T
PCNA 人抗增殖細胞核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
Apo A1 人抗載脂蛋白抗體A1 規(guī)格: 48T/96T
TAP 人抗原處理相關轉(zhuǎn)運蛋白 規(guī)格: 48T/96T
SCL70/topoⅠ 人抗硬皮病抗體70 規(guī)格: 48T/96T
HBcAb 人抗乙型肝炎病毒核心抗體 規(guī)格: 48T/96T
HBcAb-IgM 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體 規(guī)格: 48T/96T
6-88-9
三氧化硫吡啶 26412-87-3
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。
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