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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 ON 人骨粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BMP-6 人骨形成蛋白6 規(guī)格： 48T/96T

 BMPs 人骨形成蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BSP 人骨涎蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CTX-2 人骨退化特異標(biāo)志物 規(guī)格： 48T/96T

 ALP-B 人骨特異性堿性磷酸酶B 規(guī)格： 48T/96T

 MPIF-1/CCL23 人骨髓抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T

 OPN 人骨橋素 規(guī)格： 48T/96T

 Cr 人骨膠原交聯(lián) 規(guī)格： 48T/96T

 BALP 人骨堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

DH10B 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 OT/BGP 人骨鈣素/骨*蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BMPR-Ⅱ 人骨成型蛋白受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T

 BMPR-1A 人骨成型蛋白受體1A 規(guī)格： 48T/96T

 BMP-7 人骨成型蛋白7 規(guī)格： 48T/96T

 BMP-4 人骨成型蛋白4 規(guī)格： 48T/96T

 BMP-2 人骨成型蛋白2 規(guī)格： 48T/96T

 OPGL 人骨保護(hù)素配體 規(guī)格： 48T/96T

 OPG 人骨保護(hù)素 規(guī)格： 48T/96T

 GSTpi 人*硫轉(zhuǎn)移酶pi基因 規(guī)格： 48T/96T

 GSH-Px 人*過氧化酶 規(guī)格： 48T/96T

 GSH 人* 規(guī)格： 48T/96T

 GAD-Ab 人*脫羧酶自身抗體 規(guī)格：

2-氯嘧啶 1722-12-9

苯基亞甲基雙(三環(huán)己基磷)二氯化釕 172222-30-9

D-(+)-2-哌啶酸 1723-00-8

2,3-二氯噻吩 17249-29-5

3-叔丁氧羰基氨基哌啶 172603-05-3

2-氨基-3-溴-5-甲基吡啶 17282-00-7

2-氯-3-氟吡啶 17282-04-1

二甲氨基丙烯 1738-25-6

* 173838-31-8

*芐酯對甲苯磺酸鹽 1738-76-7

(R)-(+)-2-羥基丙酸甲酯 17392-83-5

(S)-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸 17407-55-5

鄰三氟甲基苯乙酮 17408-14-9

D-3-(4-吡啶基)-* 174096-41-4

5-氯吲哚 17422-32-1

6-氯吲哚 17422-33-2

1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽 174501-65-6

18-冠醚-6 17455-13-9

5-氨基-3-甲基-1,2,4-噻二唑 17467-35-5

2,4-二甲氧基溴苯 17715-69-4

48T/96T

注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。