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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷-5′-三磷酸三鈉鹽 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷-5′-三磷酸二鈉鹽 容量： 5克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷-5′-二磷酸三鈉鹽 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷-5′-單磷酸二鈉 容量： 100克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷-5′-單磷酸 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胞苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′5′-ADP瓊脂糖凝膠4B 容量： 5KU

BY4741 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 shēng huà shì jì 2.0ml離心管 容量： 1KU

shēng huà shì jì 2.0ml凍存管 容量： 2KU

shēng huà shì jì 2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲啰啉 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 2，9-二甲基-1，10-菲羅啉 容量： 1升

shēng huà shì jì 2,8-二甲基喹啉 容量： 500克

shēng huà shì jì 2，6-二叔丁基對甲酚 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 2,6-二氯醌-4-氯亞胺 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 2,6-二氯靛酚鈉鹽 容量： 25克

shēng huà shì jì 2,6-二氯靛酚 容量： 5克

shēng huà shì jì 2,5-雙(5-叔丁基苯并噻唑-2)噻吩 容量： 5克

shēng huà shì jì 2,5-雙(5-叔丁基-2-苯并惡唑基)噻吩 容量： 2～8℃ 10毫克

shēng huà shì jì 2，5-二羥基苯甲酸 容量： 25克

shēng huà shì jì 2,5-二甲基環(huán)己醇 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 2,5-二苯惡唑 容量： 500毫升

shēng huà shì jì 2，4-二硝基氯苯 容量： 1克

shēng huà shì jì 2，4-

OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

OS-RC-2(人腎癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

OVCAR-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

P19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

PA317(小鼠成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

PANC-1(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

PC-3(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2

PK-15(豬腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

QGY-7701(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RBE(人膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RF/6A(猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

RKO(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

肼 容量： 25克

注意事項(xiàng):

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。