質(zhì)粒名稱(chēng)：pHyVec4
質(zhì)粒規(guī)格：2ug

實(shí)驗(yàn)步驟:
1)質(zhì)粒提取
1.10,0001min離心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml離心管中
2.加入100溶液1,振蕩至*懸浮
3.加入200溶液2,立即輕柔顛側(cè)離心管6次,使菌體充分裂解,隨后將離心管冰上放置
3分鐘
4.加入150山溶液3,立即溫和顛倒離心管數(shù)次,冰上放置3分鐘,10,00g離心10mins
5.將步驟4的上清轉(zhuǎn)移至新的離心管(盡量去除雜質(zhì)),加入等體積的
合均勻10,000離心5min
將步驟5的上清轉(zhuǎn)移至新的離心管,加入2倍體積的無(wú)水乙醇,室溫放置5-1omin,沉
降DNA
7.10000g離心10分鐘,棄乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗滌沉淀,10,000離
心5分鐘
8.倒掉乙醇溶液,用吸水紙吸凈管壁上的水珠,室溫蒸發(fā)痕量乙醇
9.加入適量含 Rnase的TE或滅菌雙蒸水溶解質(zhì)粒DNA
2)質(zhì)粒鑒定瓊脂糖礙膠電泳
灌膠:膠中加入芡光染料< SYBR Green)
加樣:質(zhì)粒+上樣緩沖液→混勻
電泳
結(jié)果觀(guān)察:UV燈下

pHyVec4實(shí)驗(yàn)分析：
裂解細(xì)胞中除含有質(zhì)粒DNA外,還含有基因組DNA、各種RNA、蛋白質(zhì)和脂類(lèi)等物質(zhì),因
用堿裂解法除去雜質(zhì)
1、防止DNA裂解: Solution1
1)、所含糖增加溶洨黏度,維持滲透壓,防止DNA受機(jī)械剪切作用降解
2)、所含EDTA抑制酶活性
2、溶解與變性: Solution2
1)強(qiáng)堿使質(zhì)粒DNA和染色體DNA變性

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)免疫試劑盒phospho-APG4B(Ser309)

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)免疫試劑盒AFAP

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒ADORA1

豬胰島素(INS)免疫試劑盒ARSB

豬一氧化氮(NO)免疫試劑盒A2BP1

豬氧還原蛋白過(guò)氧化物酶2(PRDX2)免疫試劑盒ADAM17

豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒ARNT2 

豬血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)免疫試劑盒ABH8

豬血小板活化因子(PAF)免疫試劑盒ABI3BP

豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒ARHGAP20

豬血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒ASB10

豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)免疫試劑盒ALDH1L1

豬血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒Axin 2

豬血紅蛋白(Hb)免疫試劑盒AMH

豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)免疫試劑盒EphA8

豬血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒Acetoacetyl-CoA synthetase

豬血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒ARNTL2

豬血管生成素1(ANG-1)免疫試劑盒phospho-AANAT (Thr29)