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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅱ系列>> NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6357 |
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商品介紹
測(cè)定意義 ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測(cè)定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測(cè)定原理: NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6357 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
Candida utilis乙酰肝素檢測(cè)試劑盒
Candida utilis溶血素O檢測(cè)試劑盒
Candida utilis可溶性凋亡相關(guān)因子檢測(cè)試劑盒
Candida utilis可溶性凋亡相關(guān)因子配體檢測(cè)試劑盒
Candida utilis富組蛋白檢測(cè)試劑盒
Candida utilis高遷移率族蛋白檢測(cè)試劑盒
Candida utilis封閉蛋白2檢測(cè)試劑盒
Candida utilis封閉蛋白檢測(cè)試劑盒
NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測(cè)試劑盒對(duì)氨胂 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-mucin3/Muc3 粘蛋白-3抗體人組織轉(zhuǎn)谷氨酰(TGM2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氧 AR(劇品)Anti-mucin 5B/Muc5B 粘蛋白-5B抗體人表皮轉(zhuǎn)谷氨酰(TGM3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氧 CP(劇品)Anti-mucin4/Muc4(human) 粘蛋白-4抗體人白介素27(IL-27)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氧 PT(劇品)Anti-MuRF1/Trim63 肌肉特異性泛素蛋白連接1抗體人轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氧 99.99%(劇品)Anti-MyD88 髓樣分化蛋白抗體人4-羥壬烯(4-HNE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
98%(劇品)Anti-NIPP1/ARD1 核抑制蛋白1抗體人嗜性粒來源神經(jīng)素(EDN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
亞鈉 99.99%(劇品)Anti-Myelin Protein Zero 外周髓脂P0蛋白/P0蛋白抗體人轉(zhuǎn)狀腺素蛋白(TTR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
亞鈉 CP(劇品)Anti-PMP2 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體人轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氫二鈉 AR(劇品)Anti-MYSM1 MYSM1抗體人甘油-3-脫氫(GAPDH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三乙酯 99%Anti-MYOZ/MYOZ1 MYOZ抗體人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氟化,無水 電子級(jí),粉末Anti-MyoD1/Myf3 肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%Anti-SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠單抗人游離睪酮(F-TESTO)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三 AR,99.0%Anti-CHRNA4 煙堿型乙酰受體α4抗體人轉(zhuǎn)移因子(TF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
烯三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑,98%Anti-CHRNA7 煙堿型乙酰受體α7抗體人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,2,2-三氟乙 99.5%Anti-CHRNA2(neuronal) 煙堿型乙酰受體A2(神經(jīng)型)抗體人樁蛋白(Pax)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
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