當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅱ系列>> γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測定微量法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6385 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6385 |
商品介紹
測定意義 γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?;D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,產(chǎn)生鹽,在細胞外新陳代謝中起了重要的作用。 測定原理: γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨?;D(zhuǎn)移給N-甘氨酰,生成對硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通過測定405nm光吸收增加速率,來計算γ-GT酶活性。 自備儀器和用品: 低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
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γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測定微量法檢測試劑盒2-溴乙烯 97%,含0.1%對叔丁鄰二酚(TBC)穩(wěn)定劑白介素-1受體相關(guān)激2
5-氨乙酰鹽鹽 99%白介素-1受體拮抗劑抗原
土木香內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%(HPLC)整合素α7抗原
4-溴丁 98%粘附分子整合素β1抗原
1-Boc-單哌 98%粘附分子整合素α5抗原
5-氧化 98%整合素αV抗原
7- 98%蛋白質(zhì)酪氨激JAK-1抗原
DL-肉堿鹽鹽 98%蛋白質(zhì)酪氨激JAK-2抗原
暈 97%化蛋白酪氨激JAK-2抗原
2,6-二-O--β-環(huán)糊精 98%c-Jun氨末端激1/3多肽抗原
2,4-二巰嘧 98%化氨末端激1/2/3(pJNK1/2/3)抗原
N-十二烷-2-吡咯烷酮 99%Ki-67 Antigen
鹽多巴 98%腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原
2,2'-二羥聯(lián) 99%化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原
L-(-)-二(對酰) 97%化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
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