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土壤幾丁質(zhì)酶微量法檢測(cè)試劑盒返回列表頁

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更新時(shí)間：2022-04-27 16:01:37瀏覽次數(shù)：139次

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ATCC細(xì)胞: 其他源細(xì)胞大鼠源細(xì)胞腫瘤細(xì)胞小鼠源細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞人正常組織來源細(xì)胞

標(biāo)準(zhǔn)品: 植物標(biāo)準(zhǔn)品

生化試劑: 其它生化試劑其它化學(xué)試劑植物激素及核酸類維生素類碳水化合物類色素類培養(yǎng)基類酶類抗生素類緩沖劑類分離材料及耗材類蛋白質(zhì)類氨基酸類

PCR試劑盒: PCR-熒光探針法試劑盒

培養(yǎng)基: 顯色培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基顆粒培養(yǎng)基即用型培養(yǎng)基系列

感覺態(tài)細(xì)胞: 酵母感受態(tài)細(xì)胞發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞克隆感受態(tài)細(xì)胞

PCR檢測(cè)試劑盒: PCR檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染: 細(xì)胞組織染色細(xì)胞死亡價(jià)格細(xì)胞增殖細(xì)胞培養(yǎng)

質(zhì)粒

熒光定量PCR試劑盒: 探針法熒光定量PCR試劑盒

試劑盒: ELISA試劑盒 HPLC試劑盒生化試劑盒

進(jìn)口elisa試劑盒: 其它elisa試劑盒大鼠elisa試劑盒豬elisa試劑盒人elisa試劑盒

科研抗體: 抗體抗原

科研菌種: 實(shí)驗(yàn)菌種

生化檢測(cè)試劑盒: 光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列土壤系列離子系列糖代謝系列海藻糖系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列氧化磷酸化系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列氧化與抗氧化系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

科研細(xì)胞: 原代紅胞細(xì)胞系

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

貨號(hào)	GOY-01S6868

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詳情介紹

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	土壤幾丁質(zhì)酶微量法檢測(cè)試劑盒
規(guī)格	100管/48樣
檢測(cè)方法	微量法
貨號(hào)	GOY-01S6868

商品介紹：

測(cè)定意義

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

測(cè)定原理

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基產(chǎn)生紅色化合物，在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

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操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。