當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 琥珀酸脫氫酶(SDH)可見分光光度法
貨號 | GOY-01S6576 |
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選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6576 |
商品介紹:
測定意義
SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶,位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。
測定原理
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定2.6-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
L-乙酯鹽酸鹽 98.5%氫二,無水 ACSAnti-Polycystin 1/FITC 熒光素標(biāo)記多囊腎蛋白1抗體IgG
L-精乙酯 98%氫二,無水 用于分子生物學(xué),≥99.0% (T)Anti-Polycystin 2/FITC 熒光素標(biāo)記多囊腎蛋白2抗體IgG
L-芐酯對甲苯磺酸鹽 98%氫二,無水 for HPLC, ≥99.0% (T)Anti-PP-1/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白酯-1抗體IgG
L-天冬-β-芐酯 98%氫二,三水 AR,99.0%Anti-PP-2A/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)-2A抗體IgG
D- 98%烯基脲 98%Anti-PP-2A/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)-2A抗體IgG
L-叔丁酯鹽酸鹽 97%3-奎寧環(huán)酮鹽酸鹽 99%Anti-PP2Ac/FITC 熒光素標(biāo)記酯-2Ac抗體IgG
N-乙酰-D- 98%基化锍 98%Anti-PRL1/PTP4A1/FITC 熒光素標(biāo)記肝再生酯1抗體IgG
D-精 98%2,6-二異基 98%Anti-PRL3/PTP4A3/FITC 熒光素標(biāo)記酯3蛋白抗體IgG
琥珀酸脫氫酶(SDH)可見分光光度法壬酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品CsA ELISA Kit 大鼠A兔增殖核抗原(PCNA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2,9-二-1,10-菲啰啉鹽鹽 99%hs-CRP ELISA Kit 大鼠超敏C反應(yīng)蛋白兔嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
1-萘 高純級Beta2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit 大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M兔巨噬趨化因子(MCF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
1,2-萘醌-4-磺鈉鹽 98%EMAb ELISA Kit 大鼠抗內(nèi)膜抗體兔成纖維生長因子受體4(FGFR4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
對壬酚 98%LDL-IC ELISA Kit 大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物兔半凝集素14(GAL14)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
對壬酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,純品15-LO/LOX ELISA Kit 大鼠15脂加氧兔雌激素受體α(ERα)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-萘 97%Tn- I ELISA Kit 大鼠肌鈣蛋白Ⅰ兔肌動蛋白束蛋白(FSCN)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
(R)-(+)-1-(2-萘)乙 99+%SAA ELISA Kit 大鼠血清淀粉樣蛋白A兔肝配蛋白A3 (EFNA3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-萘鈉鹽 98+%Hpt/HP ELISA Kit 大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白兔胞外超氧化物歧化(SOD3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-肼鹽鹽 98%Alpha1-AGP ELISA Kit 大鼠α1性糖蛋白兔鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-磺酰 97%eNOS-3 ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3兔泛素關(guān)聯(lián)蛋白2 (UBAP2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
(±)-降煙堿 98%CETP ELISA Kit 大鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白兔肝配蛋白A受體10 (EPHA10)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
5-氨-2-硝三氟 ARaGT ELISA Kit 大鼠血管緊張素原兔鈣周期蛋白結(jié)合蛋白(CACYBP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-硝喹啉-N-氧化物 98%Hsp-60 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白60兔S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12 )聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-辛烯-2-酮 98%MDA ELISA Kit 大鼠二兔半胱天冬1(P1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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