當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 線粒體檸檬酸(MCA)含量微量法檢測試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6583 |
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測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6583 |
商品介紹
測定意義 CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。 測定原理: CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。 自備儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
20號(hào)染色體開放閱讀框177抗體Human TALLA-1(T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen) ELISA Kit人擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因(ATM)ELISA試劑盒,
CD244抗體Human TBX2(T-Box Protein 2) ELISA Kit人chemerin ELISA試劑盒,
巨噬炎性蛋白1α抗體Human TA(Anti-Teichoic Acid Antibody) ELISA Kit小鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒,
巨噬炎性蛋白19抗體Human SYK(Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒,
色素P450 3A4抗體Human TAB(Thyroxine Antibody) ELISA Kit大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒,
角蛋白6抗體Human SPTAN1(Alpha-Fodrin) ELISA Kit豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒,
角蛋白7抗體Human SLC16A8(Solute Carrier Family 16, Member 8) ELISA Kit兔子B瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒,
化角蛋白17抗體Human SELL(L-Selectin) ELISA Kit產(chǎn)培養(yǎng)基
線粒體檸檬酸(MCA)含量微量法檢測試劑盒(R)-3-(3-氟)-5-羥惡唑烷-2-酮 98%Anti-HRG- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記抗HRGα抗體IgG豬半凝集素1(GAL1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-羥喹啉 97%Anti-HRG- Beta/FITC 熒光素標(biāo)記抗HRGβ抗體IgG豬VI型膠原(COL6)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
6-羥 98%Anti-HSL/FITC 熒光素標(biāo)記荷爾蒙敏感脂肪抗體IgG豬性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-羥-6-吡 98%Anti-Phospho-HSL (Ser552)/FITC 熒光素標(biāo)記化荷爾蒙敏感脂肪抗體IgG豬諾龍/去睪酮(NP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4--1--1H-吡唑 97%Anti-Phospho-HSL (Ser563) /FITC 熒光素標(biāo)記化荷爾蒙敏感脂肪抗體IgG豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4--1H-咪唑 97%Anti-Phospho-HSL (Ser565) /FITC 熒光素標(biāo)記化荷爾蒙敏感脂肪抗體IgG豬ⅩⅢ(F13)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-乙酰氧 99%Anti-Phospho-HSL (Ser660)/FITC 熒光素標(biāo)記化荷爾蒙敏感脂肪抗體IgG豬結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
氨乙鹽鹽 98%Anti-HSP-20/FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-20抗體IgG豬促生長激素(GH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
反-8--6-壬酰 97%Anti-HSP22/FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-22抗體IgG豬胎盤蛋白13 (PP13)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-氨噻吩-2-羧酯 99%Anti-HSP-27/FITC 熒光素標(biāo)記HSP-27蛋白抗體IgG豬載脂蛋白B100(ApoB100)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
3-氨-2-氧吡 98%Anti-HSP-47/FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-47蛋白抗體IgG豬鈣網(wǎng)蛋白(CRT)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-硝 98%Anti-HSP-60/FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-60蛋白抗體IgG豬胎盤核糖核抑制劑(PRI)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
5-嘧 99%Anti-HSP-70/FITC 熒光素標(biāo)記HSP-70蛋白抗體IgG豬化(Methylase)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
1-(4-吡)哌 97%Anti-HSP75/TRAP-1 /FITC 熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-75抗體IgG豬N-乙酰α-D-氨葡萄糖苷(NAGLU)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2,4-二羥喹啉 97%Anti-OMPC/OMPA/FITC 熒光素標(biāo)記抗大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體IgG豬白介素19(IL-19)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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