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選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。
產品名稱:大鼠多巴胺D2受體(D2R)elisa試劑盒
英文名稱:Rat dopamine D2 receptor,D2R ELISA Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液?
具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經(jīng)費。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。?
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
抑制素βE(INHβE)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 扣囊復膜孢酵母 5g
突觸素(SYP)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金黃殼囊孢菌 1g
Slit同源物2(Slit2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 多主棒孢菌 25g
囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)因子(CFTR)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 毛霉屬 5g
谷胱甘肽S轉移酶θ2(GSTθ2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 釕含量59.5% 乙酸鈣不動桿菌 1g
谷胱甘肽S轉移酶θ2(GSTθ2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 釕含量59.5% 點柄粘蓋牛肝 5g
谷胱甘肽S轉移酶θ2(GSTθ2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 弗雷德里克斯堡假單胞菌 1g
血小板衍生生長因子D(PDGFD)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g
組織蛋白酶C(CTSC)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% Paraburkholderia sp. 5g
VI型膠原(COL6)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 短小芽孢桿菌 100mg
載脂蛋白C4(APOC4)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 紫麥角菌 100g
性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 艾登短芽孢桿菌 25g
八聚體結合轉錄因子4(OCT4)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 節(jié)桿菌 500g
Kruppel樣因子4(KLF4)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 雷州灣芽孢桿菌 100ml
V-Myc骨髓細胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 亮白曲霉 25ml
氧化低密度脂蛋白(OxLDL)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 鞘氨醇單胞菌屬 1g
補體成分9(C9)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 變異居白蟻菌 5g
生長激素(GH)(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 干酪乳桿菌 1g
大鼠多巴胺D2受體(D2R)elisa試劑盒電轉印DNA南方雜交 AA(Arachidonic Acid) 100 ul
DNA狹縫雜交(SLOT BLOT) VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) 100 ul
寡核苷酸探針同位素法DNA南方雜交* VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) 100 ul
寡核苷酸探針非同位素HRP化學發(fā)光法DNA南方雜交* VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) 100 ul
寡核苷酸探針非同位素AP化學發(fā)光法DNA南方雜交* VIL1(Villin 1) 100 ul
寡核苷酸探針非同位素辛化學發(fā)光法DNA南方雜交* VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) 100 ul
寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法DNA南方雜交* τPK1(Tau-Protein Kinase) 20 ul
寡核苷酸探針非同位素AP-BCIP/NBT法DNA南方雜交* TPA(Tissue Polypeptide Antigen) 100 ul
寡核苷酸探針非同位素辛AP-BCIP/NBT法DNA南方雜交* TPS(Tryptase) 100 ul
S1核酶保護法 TPPP(Tubulin Polymerization Promoting Protein) 20 ul
同位素法DNA斑點雜交 TrxR1(Thioredoxin Reductase 1) 100 ul
非同位素HRP化學發(fā)光法DNA斑點雜交 TRY(Trypsin) 100 ul
非同位素AP化學發(fā)光法DNA斑點雜交 TSHRAb(Thyroid Stimulating Hormone Receptor Antidoby) 100 ul
非同位素辛化學發(fā)光法DNA斑點雜交 TSP-1(Thrombospondin-1) 100 ul
非同位素HRP-DAB顯色法DNA斑點雜交 ucOC(Undercarboxylated Osteocalcin) 100 ul
非同位素AP-BCIP/NBT法DNA斑點雜交 UBE1L(Ubiquitin Activating Enzyme E1 Like Protein) 100 ul
操作流程如下:
(1)僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
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