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產(chǎn)品介紹：

Topoisomerase I (Vaccinia virus)

描述：

該 Topoisomerase I 來(lái)源于牛痘病毒（vaccinia virus），通過(guò)基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)，除此外其能識(shí)別并切割雙鏈 DNA 末端 [5’C(T)CCTT↓]，并且與 DNA 形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物。該共價(jià)復(fù)合物遇到DNA 的5’-OH基團(tuán)后，重新連接形成完整 DNA 鏈。因此，使用該酶可作為 DNA 連接的有效工具，可用于 DNA 的載體連接（TOPO 克隆載體制備）、接頭連接（NGS 建庫(kù)）等實(shí)驗(yàn)。

應(yīng)用
DNA-載體連接
接頭連接
儲(chǔ)存：-20°C 可保存 3 年。
TOPO 酶保存液：20mM Tris-HCl，pH7.8，150mM NaCl，
0.1% Tween20，50%甘油。
反應(yīng)實(shí)例 1（質(zhì)粒解旋）
10×TOPO Buffer 2.5 μl
超螺旋質(zhì)粒 DNA 1-20 μg
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
反應(yīng)實(shí)例 2（接頭連接）
10×TOPO Buffer 2.5 μl
2 M NaCl 2.5 μl
接頭 A(含 CCCTT) 5-100 pmol
接頭 B(含 5‘OH) 5-100 pmol
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
注意：（1）雙鏈接頭 A 通常 5’做 NH2 封閉修飾，以防止自連接；接頭 A 的 CCCTT 后通常包含 5-12bp 尾巴，再長(zhǎng)的尾巴會(huì)導(dǎo)致連接效率大幅下降；
（2）雙鏈接頭 B 的 5’端必須包含-OH。
（3）由于該酶應(yīng)用廣泛，在不同的實(shí)驗(yàn)中使用策略不同，需要靈活運(yùn)用。該類(lèi)實(shí)驗(yàn)請(qǐng)根據(jù)文獻(xiàn)）進(jìn)行調(diào)整。

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