本期新聞中心應(yīng)客戶要求，讓我們一起來圍觀回答新手做試驗(yàn)遇到的問題回答：
以下由客戶自訴：
1.選用的是ELISA雙抗體夾心法測定尿液標(biāo)本中人腎損害分子-1（Kim-1）水平。某一國產(chǎn)96孔ELISA試劑盒（本次試驗(yàn)只用了48孔，猜想應(yīng)該不是試劑盒的原因，由于好幾個師姐用的都是這家的試劑盒，成果還能夠，能做出規(guī)范曲線，且復(fù)孔間差異并不大）。
2.一次加樣時刻：闡明書上要求一次加樣時刻控制在5分鐘內(nèi)，而我的一次加樣時刻根本在10min以上。
試驗(yàn)前預(yù)備：
1.尿液樣本的搜集與保存：-80℃冰箱保存尿液標(biāo)本1年左右，1周前在冰中消融分裝，3000轉(zhuǎn)離心30min取上清液（因離心管與離心機(jī)不匹配，故將尿液從原離心管吸至相匹配的離心管中，原離心管下邊有尿沉渣，吸的時分未打勻而是直接吸的，不知道是否對成果有影響？），需要用的放在4度冰箱（做試驗(yàn)用的標(biāo)本也就是放在4度冰箱約1周的標(biāo)本），暫時不需要用的放在-20度冰箱。
2.試劑盒從4度冰箱取出，將需要用的試劑及板拿出來放在試驗(yàn)臺平衡45min。
3.尿液試驗(yàn)前未做稀釋處理。
操作步驟：
1.規(guī)范品的稀釋與加樣：依照闡明書，我選用的筆直加樣，只是加樣速度慢，盡量加至底部，不觸壁，不產(chǎn)生氣泡。
2.溫育闡明書上要求30min，而我的大概是35min，是在培養(yǎng)箱中進(jìn)行的。
3.洗刷：也是加樣速度慢，悉數(shù)加樣后停了1min，甩干（甩到甩不出液體停止），然后在濾紙上拍干（拍到?jīng)]有液體流出停止），就這樣重復(fù)了5次。
4.顯色：剛開始培養(yǎng)箱溫度沒升至37度，我也先放里邊了，是等升至37度后開始計時的。
疑問：
1.為什么規(guī)范孔的濃度會呈現(xiàn)如上圖的成果？
2.為什么復(fù)孔間的差異這么這么的大？
試驗(yàn)中沒有少加或加錯樣，懇請各位戰(zhàn)友幫助找原因，不勝感激！
1.為什么規(guī)范孔的濃度會呈現(xiàn)如上圖的成果？  

你規(guī)范品也就120-80ng/L有些線性，可使后邊的40-10ng/L OD值又再次俄然高上去了，且40-10ng/L的OD值復(fù)孔間偏差還算不大。我覺得你先從稀釋的視點(diǎn)看看吧，闡明書供給的稀釋辦法太費(fèi)事，可能會導(dǎo)致操作時呈現(xiàn)問題，你不如在潔凈的EP管中依照規(guī)范品的比例關(guān)系進(jìn)行稀釋，稀釋完后再一致參加酶標(biāo)板孔中。
2.為什么復(fù)孔間的差異這么這么的大？ 我覺得兩方面原因，你規(guī)范品復(fù)孔差異大，可能跟稀釋方法有關(guān)。你的樣本OD值3復(fù)孔間有時會呈現(xiàn)偏差較大的狀況 可能跟洗板有關(guān)系，用洗板機(jī)洗板洗，可能與你尿樣未混勻也有關(guān)（雖然可能性很?。??？墒俏矣X得和你說的：“故將尿液從原離心管吸至相匹配的離心管中，原離心管下邊有尿沉渣，吸的時分未打勻而是直接吸的”沒有什么關(guān)系，究竟你已經(jīng)離心取上清了。
至于加樣時刻5min仍是10min，溫預(yù)30min，仍是35min等等操作上與闡明書略有差異的當(dāng)?shù)囟疾皇浅尸F(xiàn)你這種成果的直接原因，究竟雙抗體夾心法的試劑盒對操作和時刻沒有競爭法那么嚴(yán)厲。