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產品名稱:SK-BR-3細胞,SK-BR-3細胞
產品用途:科研
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產品特點:活性好、存活率高、實驗成果特征明顯
產品來源:人組織、小鼠組織、大鼠組織、兔組織等動物組織
產品運輸:免費快遞
產品包裝:瓶裝
產品用途:細胞培養(yǎng)研究
SK-BR-3細胞,SK-BR-3細胞傳代細胞細胞實驗的注意事項:
1、實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。
2、無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之*無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
3、小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4、工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應避免引起aerosol之產生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
5、定期檢測下列項目:5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。5.3.無菌操作臺內之airflow壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin1:750),定期更換水槽的水
6、粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,細胞嬌弱,放置時間不宜過長。
7、開紫外線照射臺的時候,就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后,找個毛巾擦干上面的水。(具體情況可根據實驗室情況操作)
SK-BR-3細胞,SK-BR-3細胞傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%*+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉*,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
郵購備注: 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若有懸浮的細胞,請離心收集細胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進口胎牛血清,剛接到細胞時血清濃度可以在15%。本產品經過了細菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測。
我們將為客服提供全面的細胞計數、細胞染色、(MTT)比色法、細胞培養(yǎng)、細胞污染、常規(guī)生物材料細胞毒性實驗等等細胞實驗技術服務。
細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
具體操作 (一)實驗前準備: 1.將水浴鍋預熱至37℃ 2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。 3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
(二)取出凍存管: 1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。 2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
(三)迅速解凍: 1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。 2.約1-2min后凍存管內液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
(四)平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min。
(五)制備細胞懸液: 1.吸棄上清液。 2.向離心管內加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。 (六)細胞計數: 細胞濃度以5×105/ml為宜。
(七)培養(yǎng)細胞 將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內,將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤: 1.水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。 2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。 3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。 4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。
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