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GTPase Cdc42抑制劑(IN)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-24 15:38:15瀏覽次數(shù):472次

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貨號 FS-X11081
GTPase Cdc42抑制劑(IN)正在熱銷的產(chǎn)品:ALR/FITC 熒光標記肝再生增強因子抗體IgG化鍶,六水 99.99% metals basis
ALT1/GPT 1/FITC 熒光標記谷氨氨轉(zhuǎn)移1抗體IgG結(jié)晶硫鈉,十水 AR,≥99.0%
AMACR/P504S /FITC 熒光標記α-酰消旋抗體IgG結(jié)晶硫鈉,十水 CP,≥97.0%
HADHSC (human)/FI

中文名稱:GTPase Cdc42抑制劑(IN)

英文名稱:IN

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號:FS-X11081

產(chǎn)品介紹:

IN是一個選擇性的GTPase Cdc42抑制劑,IC50值是2uM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:425399-05-9

純度:98.64%

分子量:306.4

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

轉(zhuǎn)化生長因子β4抗體TGF β4 Lefty

suan化微管相關(guān)蛋白抗體 phospho-Tau protein(Ser202)

轉(zhuǎn)錄因子12抗體 TCF12

跨膜轉(zhuǎn)運蛋白21抗體 TMP21

睪特異蛋白抗體 TSBP

THAP2蛋白抗體 THAP2

瞬時受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族) TRPM5

瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族) TRPM4

轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 Transportin 1

核凋亡因子THAP1抗體 THAP1

精形成相關(guān)凋亡蛋白2抗體 TSARG2

細胞毒顆粒相關(guān)蛋白TIA-1抗體 TIA1
GTPase Cdc42抑制劑(IN)嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 3-Acetoxy-4-cadinen-8-one

黃硬皮馬勃 3-Acetoxy-24-hydroxydammara-20,2

靈芝 30-Hydroxylup-20(29)-en-3-one

擬威克酵母屬 3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphtha

謝瓦曲霉 3',4',7-Trimethoxyflavan

尖孢鐮孢 3,22-Dihydroxyolean-12-en-29-oic

傳染性喉氣管炎病 3-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)pro

大腸埃希 2β-Hydroxykolavelool

PET28a-EGFP 熒光蛋白大腸桿(綠色) 2'-O-Methylbroussonin C

 2-Epitormentic acid

*蛹蟲草 29-Norcycloart-23-ene-3,25-diol

綠色木霉 28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-o

赭曲霉 25-Hydroxycycloart-23-en-3-one

清酒假絲酵母 22-Dehydroclerosteryl acetate

枯草芽孢桿 21αH-24-Norhopa-4(23),22(29)-die

 


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