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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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MEK抑制劑(Refametinib)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-23 16:15:25瀏覽次數(shù):252次

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貨號(hào) FS-X10968
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FASL ELISA Kit 大鼠凋亡相關(guān)因子配體硫鈰 AR
FAS/CD95 ELISA Kit 大鼠

中文名稱:MEK抑制劑(Refametinib)

英文名稱:Refametinib

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào):FS-X10968

產(chǎn)品介紹:

Refametinib(RDEA119,BAY86-9766)是MEK抑制劑,對MEK1和MEK2的IC50分別為19nM和47nM,有抗腫瘤活性。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):923032-37-5

別名:BAY 869766;BAY 86-97661;RDEA119

純度:98.46%

分子量:572.34

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

美麗鹽單胞菌人鈣網(wǎng)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠催乳(PRL)

帚狀曲霉人網(wǎng)膜Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)

礦泉水  大腸菌群人基質(zhì)γ羧基谷蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)

絲球霉屬人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)

局限青霉人螺旋肽Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)

首爾紅色桿菌人溶體相關(guān)膜蛋白2Bacillus thuringiensis subsp. israelensis小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

支氣管敗血波氏菌人軟骨糖蛋白39Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

節(jié)桿菌人不透光相關(guān)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)

大腸埃希菌人鞭毛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)

柱狀假絲酵母人多聚血清蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)

根霉人胞漿免疫球蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)

大豆慢生根瘤菌人纖維介蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)

嗜嗜熱雙歧桿菌豬亞種人泛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)

草螺菌人類粘蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)(SP)

釀酒酵母人彈性蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(zhì)(SP)

孟氏假單胞菌人套膜蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠血管活性腸肽(VIP)

離子通道蛋白27抗體桂花耳COC1細(xì)胞耐藥亞株

跨膜受體蛋白Notch-2抗體冷杉囊孔菌昆蟲卵巢細(xì)胞

生殖細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體小鱗毛銹傘貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞

親核β1抗體粉色小菇牛陀螺狀細(xì)胞
MEK抑制劑(Refametinib)煙曲霉 Tanshinlactone過氧化物體增殖物激活受體α2

球孢白僵 Noreugenin甘油二酯O-酰基轉(zhuǎn)移

根瘤 Pinostilbenoside周期Ⅰ

異常威克漢姆酵母 ConfluentinAurora激A

根霉屬 Norcepharadione B分裂周期因子20

果生鏈核盤 Carpachromene周期B1

釀酒酵母 Penduletin分裂周期因子2

雞腿菇 SteppogeninMyc原癌基因蛋白

相思根瘤 Hinokiol內(nèi)啡肽

糙皮側(cè)耳 Canadine諾達(dá)病

糞腸球 Friedelanol纖維

費(fèi)氏中華根瘤(未復(fù)核) Oleuropeic acid補(bǔ)體1q

大禿馬勃 Lecanoric acid精蛋白1

釀酒酵母 Dihydrophaseic acid核因子κB

假單孢 Lacinilene C三磷腺檸檬裂解

 


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