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貨號 | FS-X10965 |
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產(chǎn)品介紹:
IPA-3是一種選擇性的,ATP非競爭的PAK1抑制劑,IC50值為2.5μM,對PAKs4-6沒有抑制作用。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:42521-82-4 純度:98.0% 分子量:350.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:PAK1抑制劑(IPA-3)
英文名稱:IPA-3
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10965
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
枯草芽孢桿菌枯草亞種人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子Bacillus thuringiensis小鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)
白僵菌人IPO-38蛋白Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)
枯草芽孢桿菌人切除修復交叉互補基因1Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)
銅綠假單胞菌人羰基化蛋白Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)
綠色木霉人磷化核因子κB抑制蛋白α(IKKα human )Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)
釀酒酵母人樁蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)
彎孢人小表皮粘蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)
大腸埃希菌人類似60S核糖體蛋白L21Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)
紫色鏈霉菌人類粘蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)
平滑假絲酵母人MAX二聚化蛋白1Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)
硬皮馬勃屬人水閘蛋白14Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)
銹色野野村氏菌人可溶性半乳糖結合凝集3Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)
乳粉 沙門氏菌(陰性)人主要穹窿蛋白Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)
小卷霉人泛蛋白DBacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)
露濕漆斑菌人toll樣受體2Bacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)
根霉年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)
少突膠質細胞轉錄因子2抗體豹斑毒鵝膏菌正常大鼠腎細胞
增食欲B/欲激B亞拉巴馬全緣孔菌非洲綠猴腎細胞
寡腺合成-1斑點嗜藍孢孔菌人APP-PS1雙基因轉染CHO細胞株
陽離子轉運器1抗體小果雞樅小鼠睪丸上皮細胞15P-1(干細胞庫保藏)
PAK1抑制劑(IPA-3)日本根霉 2-乙酰α葡萄糖
釀酒酵母 托品酮促性腺抑制
少根根霉 雌三磷化腺活化蛋白激
漢遜德巴利酵母 犬尿喹啉磷化蛋白激A
榆黃菇 β-Tocotrienol增殖相關蛋白
香菇 3-甲基鄰苯二叉頭蛋白L2
芽孢桿屬 1-氨基茚滿類固生成因子1
哈茨木霉 SorafenibDoublesex和Mab-3相關轉錄因子
科赫芽胞桿 Sorafenib叉頭型基因P3
大腸埃希 Canertinib (CI-33)腺環(huán)化
釀酒酵母 遠志擴張性共濟失調突變因子
疣梗青霉 α-托品半胱雙加氧
變異鏈球 咖啡苯乙酯半胱亞磺脫羧
蠟樣芽孢桿 水蘇四糖,四水維生D
三方氏酵母 α-松脂交替氧化
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