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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MEK1/2別構(gòu)抑制劑(AS703026)
貨號(hào) | FS-X10980 |
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產(chǎn)品介紹:
AS703026是一種高效,具有選擇性,ATP非競(jìng)爭(zhēng)性的MEK1/2別構(gòu)抑制劑,主要用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1236699-92-5 別名:Pimasertib;MSC1936369B 純度:96.80% 分子量:431.2 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:MEK1/2別構(gòu)抑制劑(AS703026)
英文名稱:AS703026
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10980
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
蘇云金芽孢桿菌考馬斯亮藍(lán)快速染色液Escherichia coli小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)
新疆鹽紅菌抗原熱修復(fù)試劑(0×濃縮液)Escherichia coli小鼠維生B6(VB6)
陰溝腸桿菌檸檬鹽緩沖液(抗原熱修復(fù)試劑)(0.01M pH6.0)Escherichia coli小鼠維生B6(VB6)
釀酒酵母檸檬鹽緩沖液 (1M pH6.0)Escherichia coli小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)
黃紅菇二基聯(lián)/DAB染色試劑盒(25×)Escherichia coli小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)
沙漠奇異球菌DAPI染色液(核染色液)Escherichia coli小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)
柱彎孢蘇木-伊紅染色試劑盒Escherichia coli小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)
金針菇辣根過(guò)氧化物(辣根)Escherichia coli小鼠可溶性P選擇(sP-selectin)
熱帶假絲酵母抗體稀釋液Escherichia coli小鼠可溶性P選擇(sP-selectin)
鼠李糖乳桿菌中性樹膠封片劑Escherichia coli小鼠S0蛋白(S-0)
維羅納假單胞菌麗春紅染色液Escherichia coli小鼠S0蛋白(S-0)
蘭鏈霉菌紅裂解液Escherichia coli小鼠白介1(IL-1)
空腸彎曲桿菌SDS-PAGE凝膠制備試劑盒Escherichia coli小鼠白介1(IL-1)
蒼黃擬無(wú)枝菌多聚賴防脫磨砂玻片(防脫片載玻片)Escherichia coli小鼠白介1β (IL-1β)
解脂亞羅酵母上樣緩沖液-還原型(5×)Escherichia coli小鼠白介1β (IL-1β)
殼菌SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液-非還原型Escherichia coli小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)
核受體相關(guān)因子-1抗體新月彎孢表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞
伴肌動(dòng)蛋白抗體螺卷毛殼表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞
核呼吸因子-1抗體齊整小核菌人紅系白血病細(xì)胞
可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體煙色曲霉人干細(xì)胞因子單克抗體細(xì)胞株
MEK1/2別構(gòu)抑制劑(AS703026)奶酪假絲酵母 澤瀉B乙酯絲裂原活化蛋白激
森林曲霉 Lupiwighteone胰島樣生長(zhǎng)因子
栗疫 偽異沙蟾精促脂
黑曲霉 皂草; 皂草黃阿黑皮原
單胞屬 Dodoviscin I?;?/span>
健強(qiáng)地霉 Royleanone尾加壓I
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病) 正庚肟黑色代謝
盤孢 cis-MoschamineDNA甲基轉(zhuǎn)移1
木木霉 乙-[2-(4-辛基苯基)]乙DNA甲基轉(zhuǎn)移3A
鏈格孢屬 Nb-FeruloyltryptamineDNA甲基轉(zhuǎn)移3B
單增李斯特氏 乙-[2-(4-辛?;交?]乙酯甲基胞嘧啶雙加氧
大孢小孢酵母 Tataramide B維生B6
金針菇(黃) 1-茚滿鏈球抗體
玫煙色棒束孢 Nothofagin短鏈脂肪
金黃殼囊孢 Fischeria A組織蛋白A
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