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貨號(hào)	FS-X10649

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：廣譜MMP抑制劑(Batimastat)

英文名稱：Batimastat

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

貨號(hào)：FS-X10649

產(chǎn)品介紹:

Batimastat是一種有效的廣譜MMP抑制劑，作用于MMP-1，MMP-2，MMP-9，MMP-7和MMP-3，IC50分別為3，4，4，6和20nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：130370-60-4

別名：BB94

純度：98.01%

分子量：477.64

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

樺剝管孔菌羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF3 Antibody二-N-乙酰殼二糖(CTBS)

海馬齒平臍蠕孢FITC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF5 Antibody耳椎蛋白90(OC90)

異常威克漢姆酵母堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF6 Antibody耳纖維源性蛋白(OTOR)

類阿達(dá)青霉膠體金標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAM1 Antibody耳蝸蛋白(OTOS)

Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF7 Antibody耳石蛋白1(OTOL1)

苜蓿中華根瘤菌生物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAM2 Antibody耳錨蛋白(OTOA)

毛云芝辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-Transketolase/TKT Antibody耳膠蛋白(OTOG)

艾阿華諾卡氏菌Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳畸蛋白(OTOF)

乳酒假絲酵母Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤3(OTOP3)

蜜蜂生球擬酵母APC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤2(OTOP2)

漏斗棱孔菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤1(O)

枯草芽孢桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAP1 Antibody兒茶-O-甲基轉(zhuǎn)移(COMT)

食品檢測(cè)用O157:H7大腸埃希氏菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody鱷失調(diào)蛋白(ATCAY)

泡盛曲霉辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREM1 Antibody腭/肺/鼻上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白(PLUNC)

盾殼霉生物標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREML1 Antibody惡性腦腫瘤缺失蛋白1(DMBT1)

糖多孢菌(可訂)APC標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREX1 Antibody多藥耐藥關(guān)聯(lián)蛋白1(MRP1)

蛋白磷2C抗體德氏乳桿菌乳亞種（萊氏曼氏乳桿菌）人體肺癌組織提取物

脫氫激亞型2抗體斯氏李斯特氏菌人體乳腺癌組織源組織提取物

環(huán)指蛋白3抗體乳乳球菌乳亞種人體甲狀腺癌組織源組織提取物

蛋白激A受體2α亞基抗體Chryseobacteriumjeonii人體膀胱癌組織源細(xì)胞
廣譜MMP抑制劑(Batimastat)毛木耳鉻鈉,四水同型半胱

枯草芽胞桿硝銪(III) 六水合物Toll樣受體4

大腸埃希氏定量標(biāo)準(zhǔn)株硫鉺(III)八水化合物核轉(zhuǎn)錄因子

枯草芽孢桿硝鉺五水合物絨毛膜促性腺

異常漢遜酵母溴化鉛肌肉生長(zhǎng)抑制;肌抑

綿羊肺炎支原體 (S)-(-)--苯基-1-D-乳

印度洋細(xì)小棒狀 (R)-(+)--苯基-1-結(jié)合珠蛋白

芽孢桿四氫噻吩-3-酮酮羧化

綠粘帚霉 2--3--5-

黏膜乳桿 2-溴-3--5-輪狀病

枯草芽孢桿磷氫二鈉,二水新孢子蟲(chóng)病

瓦克青霉氟化鎳淀粉

氏假單胞硫鈷,七水羧甲基纖維

新月彎孢硝鈷,六水胃蛋白

那波鏈霉亞鈀果糖-1,6-二磷
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)