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貨號(hào)	FS-X10492

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：BRafV600E抑制劑(LGX818)

英文名稱：LGX818

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

貨號(hào)：FS-X10492

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：LGX818

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

LGX818是一種可突變體BRafV600E的抑制劑，IC50值為0.3nM，具有良好的抗腫瘤功效。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1269440-17-6

別名：Encorafenib

純度：99.88%

分子量：540.01

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巨型艾美耳球蟲磷化Src原癌基因抗體Anti-FSCN1 Antibody信號(hào)淋巴激活分子家族成員7(SLAMF7)

高地芽孢桿菌STAC2蛋白抗體Anti-FSHB Antibody(PB0138)信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)

土曲霉轉(zhuǎn)錄因子SOX30抗體Anti-FSHR Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5B(STAT5B)

產(chǎn)堿假單胞菌13號(hào)染色體開放閱讀框32抗體Anti-FST Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5A(STAT5A)

布雷正青霉線粒體相關(guān)富含半胱蛋白抗體Anti-FSHR Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子4(STAT4)

美澳型核果褐腐病菌跨膜接頭蛋白SIT抗體Anti-FURIN Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)

黏結(jié)珊瑚狀放線菌SKAP55蛋白抗體Anti-FSTL3 Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)

栗疫菌沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白2抗體Anti-FUS Antibody信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)

木耳腫瘤/抗原11.2抗體Anti-FUT4 Antibody鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)

巨大芽孢桿菌平滑肌蛋白抗體Anti-FUT1 Antibody鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)

香菇SHROOM1蛋白抗體Anti-FUT3 Antibody心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白C(MYBPC3)

土生叢毛單胞菌磷化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體Anti-FXYD1 Antibody(PB0740)心營養(yǎng)樣因子1(CLCF1)

枯草芽孢桿菌SCK蛋白抗體Anti-FZD1 Antibody心型脂肪結(jié)合蛋白(FABP3)

根霉磷鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Anti-FZD3 Antibody心磷脂?；D(zhuǎn)移1(LCLAT1)

異酒香酵母精結(jié)合蛋白2抗體Anti-FZD4 Antibody心磷脂合(CLS)

蠟狀芽孢桿菌唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集1抗體Anti-G6PD Antibody心肌營養(yǎng)1(CT1)

Sestrin3抗體費(fèi)氏桿菌謝氏亞種HK-2人腎皮質(zhì)曲小管上皮細(xì)胞

癲癇樣相關(guān)蛋白6抗體大腸埃希氏桿菌原代細(xì)胞

組蛋白連接作用蛋白抗體螢光假單胞菌人成骨細(xì)胞

線粒體乙酰化3抗體潮濕纖維單孢菌人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
BRafV600E抑制劑(LGX818)軍威鎮(zhèn)梅奇酵母 2-溴-3'-羥基苯乙酮角蛋白18-M30

植物乳桿植物亞種 Gly-His磷化信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子2

藤黃淺藤黃鏈霉 1，4-二（二甲基硅烷基）苯端粒

韓國游動(dòng)微 4-氨基-3-甲氧基信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子2

黑曲霉烯基三丁基錫乳脫氫B

嗜乳桿原酯酮脫氫激4

短波單胞 Boc-Orn(Z)-OHγ氨基丁轉(zhuǎn)氨

山梨木糖假絲酵母四正丁基硫IκB激-α

器腐霉 4-吡咯烷丁色P4503A2

害艾美耳球蟲魏因勒卜鏈接劑色P4502C11

黑木耳 4-甲基-1-茚酮可溶性FMS樣酪激1

蘋果黑腐皮殼 Grubbs 2 代催化劑含核結(jié)合寡聚化域蛋白2

燼灰孢鏈霉 4-羧基苯肼鹽鹽β-防御-14

桔青霉 3-苯基-1H-吡唑可溶性Endoglin

釀酒酵母 1,3-雙(2,4,6-苯基)-4,5-二氫咪唑鎓四氟鹽帶3蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)