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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> c-Met和ALK抑制劑(Crizotinib)
貨號(hào) | FS-X10343 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Crizotinib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Crizotinib是一種有效的c-Met和ALK的抑制劑,IC50值分別為11nM和24nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):877399-52-5 別名:PF-02341066 純度:99.97% 分子量:450.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Crizotinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號(hào):FS-X10343
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
小葉相思根瘤菌磷化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體Human MINK1 免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
束型青霉磷化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體Human MIPEP 免疫球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)
天津李時(shí)珍氏菌嗜粒趨化蛋白22抗體Human MIPOL1 免疫球蛋白輕鏈kappa(κ-IgLC)
金格桿菌甲硫腦啡肽抗體Human MKL1(MKL/myocardin-like protein 1) 免疫球蛋白結(jié)合蛋白(BIP)
橄欖色硬膜鏈霉菌抗體Human MITD1 免疫球蛋白γ-1鏈C區(qū)(IGHGI)
粉樹(shù)孢基質(zhì)金屬蛋白9抗體Human Mitofilin 免疫球蛋白M(IgM)
Sphingomonas panni 原癌基因M-ras抗體Human F12(Coagulation factor XII) 免疫球蛋白j鏈(Ig-j)
魯氏接合酵母單核趨化蛋白1抗體Human MKNK2 免疫球蛋白G4(IgG4)
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)抗體Human MFN1 免疫球蛋白G3(IgG3)
漢遜德巴利酵母雞支原體抗體Human METT10D 免疫球蛋白G1(IgG1)
蘇云金芽胞桿菌熊本亞種線粒體轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human MED4 免疫球蛋白G(IgG)
荔枝有絲分裂抑制缺陷蛋白1抗體Human MED6 免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)
東方伊薩酵母膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體Human MEF2A 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)
色串孢屬粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human MED8 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)
棲果盤孢粘膜血管定居因子抗體Human MEIS3 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)
停滯棒桿菌抑癌基因抗體Human MUC5B(Mucin-5B) 免疫球蛋白E(IgE)
粗皮側(cè)耳(平菇)Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鹽小檗堿
基桿菌Phenylobacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品鹽青藤堿
幽門螺桿菌Helicobacter│pylori 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR巖白菜
c-Met和ALK抑制劑(Crizotinib)多主葡萄殼 Nε-CBZ-L-賴芐酯鹽鹽黑濃集
維氏紅細(xì) 2.6-二氟-4-甲氧基苯紅生成
靈芝(紅芝, 赤芝) 2,5-二苯甲琥珀脫氫
球孢白僵 4--2,5-二甲氧基苯花生四烯
圣保羅沙門氏 2.6-二苯環(huán)孢A
鹽反硝化枝芽孢桿 5-喹啉環(huán)磷鳥(niǎo)
綠色粘帚霉 5-甲基-4,6-二羥基嘧啶環(huán)磷腺
金黃色葡萄球 2 -苯乙基 β-D -半乳糖環(huán)氧合1
高地芽孢桿 噻吩-α-磺酰環(huán)氧合2
小平菇(秀珍菇) 2,3-二苯緩激肽
蘇云金芽孢桿 2,6-二溴蒽醌緩激肽受體B2
鼠乳桿 3,5-二苯肼鹽鹽氧化
Starmerella sp. 2,6-二氟吡啶-3-黃腺二核
枯草芽孢桿枯草亞種 D-乙酯鹽鹽黃體生成
樟疫霉 6-溴靛紅黃體生成釋放
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