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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 整合素αV抑制劑(CWHM-12)
貨號(hào) | FS-X10731 |
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中文名稱:整合素αV抑制劑(CWHM-12)
英文名稱:CWHM-12
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10731
產(chǎn)品介紹:
CWHM-12是一種有效的αV integrins抑制劑,抑制αvβ8,αvβ3,αvβ6和αvβ1,IC50分別為0.2,0.8,1.5和1.8nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1564286-55-0 純度:98.97% 分子量:590.47 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
屎腸球菌沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗原Anti-ECRG4 Antibody人前心鈉肽(Pro-ANP)
金針菇S相激相關(guān)蛋白抗原Anti-EDNRA Antibody人前心鈉肽(Pro-ANP)
干酪乳桿菌碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4Anti-ECRG4 Antibody人角蛋白13(CK-13)
枯斑擬盤多毛孢碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A7抗原Anti-EDNRA Antibody人角蛋白13(CK-13)
Lactococcus sp.線粒體促凋亡蛋白抗原Anti-EDNRA Antibody人角蛋白17(CK17)
匍匐曲霉乙酰轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗原Anti-EEF1A1 Antibody人角蛋白17(CK17)
草青霉磷鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原Anti-EEF1B2 Antibody人制瘤M受體(OSMR)
Pseudarthrobacter運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1抗原Anti-EEF1G Antibody人制瘤M受體(OSMR)
糞纖維單胞菌磷化Smad2抗原Anti-EEF1B2 Antibody人B淋巴瘤因子3(Bcl3)
污黑腐皮殼Smad4抗原Anti-EEF2K Antibody人B淋巴瘤因子3(Bcl3)
平菇新宇711Smad 7(多肽)Anti-EFEMP1 Antibody人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)
少根根霉磷化SMAD(p-Ser425)抗原Anti-EEF2K Antibody人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)
曲霉突觸相關(guān)膜蛋白25抗原Anti-EFEMP2 Antibody人P27蛋白(P27)
褐色諾卡氏菌Snail蛋白抗原Anti-EFNA2 Antibody人P27蛋白(P27)
北方蜜環(huán)菌因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原Anti-EFNA3 Antibody人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)
枝孢屬超氧化物歧化1抗原Anti-EFNB1 Antibody人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)
前列腺癌相關(guān)蛋白4抗體泛養(yǎng)副球菌人膽管上皮癌細(xì)胞
線粒體導(dǎo)肽水解β抗體金黃亞種人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞
富含脯蛋白15抗體日勾維腸桿菌人慢性髓系白血病細(xì)胞
香葉烯基轉(zhuǎn)移1β抗體解肝磷脂土地桿菌人永生化肝細(xì)胞
整合素αV抑制劑(CWHM-12)大腸埃希 4-(三氟甲基)芐溴鉤端螺旋體IgG
孢小克銀漢霉 二異基膦TH糖蛋白
地衣芽孢桿 4-氟三氟甲苯COL15A1
山茶盤孢 4-溴三氟甲苯對(duì)氧磷2
枯草芽孢桿枯草亞種 3,5-雙(三氟甲基)苯甲纖連蛋白1
淡紫擬青霉 3-氟三氟甲苯腎上腺
耐堿放線孢 2-甲酰基苯成纖維生長因子15
Bacillus tequilensis (甲氧基)三苯基化磷三磷腺
粟酒裂殖酵母 4'-氟-3'-乙酮一磷腺
黑曲霉 2,5-二羥基-1,4-二噻烷腺核
乙鈣不動(dòng)桿 2-氟-4-甲苯過氧化氫
大腸埃希氏 5-氟-2-甲過氧化物
產(chǎn)氨短桿 5-氟ATP
果生鏈核盤 5-甲氧基靛紅成纖維生長因子21
根瘤 6-氟氨基轉(zhuǎn)移
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