當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> STING介導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生抑制劑(CCCP)
貨號 | FS-X10810 |
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產(chǎn)品介紹:
CCCP通過破壞線粒體膜電位(MMP)來抑制STING介導(dǎo)的IFN-β產(chǎn)生。CCCP且抑制STING及其下游信號分子TBK1和IRF3的激活。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:555-60-2 別名:Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone;Carbonyl Cyanide m-Chlorophenylhydrazone 純度:99.83% 分子量:204.62 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:STING介導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生抑制劑(CCCP)
英文名稱:CCCP
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg
貨號:FS-X10810
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
多主葡萄殼菌人表皮生長因子Anti-NOXO1 Antibody人脂蛋白α(Lp-α)
葡萄座腔菌人堿性成纖維生長因子Anti-NOX3 Antibody人脂蛋白α(Lp-α)
糙皮側(cè)耳大鼠可溶性CD14Anti-NPAS1 Antibody人骨膠原交聯(lián)(Cr)
變平滑假絲酵母小鼠β淀粉樣蛋白1-42Anti-NPAS2 Antibody人骨膠原交聯(lián)(Cr)
*灰葡萄孢大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激Anti-NPHP4 Antibody人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)
枯草芽胞桿菌小鼠8羥基脫氧鳥Anti-NPDC1 Antibody人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)
考克氏菌屬人巨噬炎性蛋白5Anti-NPDC1 Antibody人脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)
水稻節(jié)桿菌小鼠白介1受體拮抗劑Anti-NPRL2 Antibody人脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)
果生鏈核盤菌大鼠雄激Anti-NR1I3 Antibody人吡啶交聯(lián)物(PY)
薄層菌屬人可溶性E選擇Anti-NR4A3 Antibody人吡啶交聯(lián)物(PY)
西唐氏鏈霉菌人可溶性間粘附分子1Anti-NR2F2 Antibody人骨橋(OPN)
黑曲霉小鼠降鈣原Anti-NRAS Antibody人骨橋(OPN)
*灰葡萄孢大鼠Toll樣受體4Anti-NRAS Antibody人γ基丁(GABA)
熒光假單胞菌大鼠多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Anti-NRBF2 Antibody人γ基丁(GABA)
大腸埃希氏菌小鼠胰島自身抗體Anti-NRIP3 Antibody人P物質(zhì)受體(SP-R)
擴(kuò)展短桿菌人間粘附分子2Anti-NRIP2 Antibody人P物質(zhì)受體(SP-R)
核糖體蛋白S6修飾樣蛋白A抗體長柄條孢牛肝人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
環(huán)指蛋白213蠟?zāi)偃薚淋巴瘤細(xì)胞Jurkat亞系
Rap2A抗體猴頭人前列腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株
受體表達(dá)蛋白5/息肉相關(guān)蛋白抗體FV21(金針菇)C57小鼠黑色瘤瘤株
STING介導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生抑制劑(CCCP)綠色木霉 改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基白介13
釀酒酵母 烯基基二硫白介15
彎孢 烯基二硫白介17A
大腸埃希 三亞苯白介18
紫色鏈霉 2-氨基-5-氟吡啶白介1β
滑假絲酵母 乙酰酮鈷(III)白介2
硬皮馬勃屬 4-甲苯三氟白介25
銹色野野村氏 2-甲基-1,3-(MPO)白介3
乳粉 沙門氏(陰性) 1,6-二己烷白介4
小卷霉 2,4,6-三氮白介5
露濕漆斑 N,N-二甲基烯基白介6
根霉 3,5-二甲氧基甲酯白介8
運(yùn)動節(jié)桿 4-氨基苯頻哪酯二
南類芽孢桿 (S, S)-環(huán)己二補(bǔ)體蛋白3
球孢白僵 2′-溴苯乙酮超氧化物歧化
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