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貨號	FS-X10559

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：磷脂酶C抑制劑(D609)

英文名稱：phosphatidyl choline-specific phospholipase C inhibitor

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10559

產(chǎn)品介紹:

D609是一種選擇性的磷脂酰dan堿特異性的磷脂酶C(phosphatidyl choline-specific phospholipase C)抑制劑，Ki值為6.4μM，常用于抗病毒和抗腫瘤研究。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：83373-60-8

純度：98.0%

分子量：266.46

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

聚生殼菌ZCWCC1抗體Anti-MT-CO1 Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白9(GLUT9)

破傷風(fēng)梭菌鋅指蛋白300抗體Anti-MT-ND4 Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白8(GLUT8)

葡萄座腔菌鋅指蛋白ZBTB39抗體Anti-MTA2 Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白7(GLUT7)

釀酒酵母鋅指蛋白201抗體Anti-MTA1 Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白6(GLUT6)

球孢白僵菌鋅指蛋白Zic2抗體Anti-MTOR Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白5(GLUT5)

多主葡萄殼菌鋅指蛋白Zdhhc18抗體Anti-MTOR Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)

耐鹽枝孢鋅指蛋白Zdhhc12抗體Anti-MTDH Antibody(PB0309)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白14(GLUT14)

肉桂色鏈霉菌著絲粒ZW10相互作用蛋白1抗體Anti-MTR Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白12(GLUT12)

土壤彎孢鋅指/環(huán)指蛋白1抗體Anti-MTTP Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白11(GLUT11)

維多利亞隱球酵母鋅指/環(huán)指蛋白2抗體Anti-MTUS1 Antibody葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白10(GLUT10)

假單胞菌鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位5(PGM5)

阪崎腸桿菌鋅指蛋白230抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位3(PGM3)

多分枝毛霉鋅指脂蛋白-1b抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位2樣蛋白1(PGM2L1)

角形小孔菌zeta相關(guān)蛋白70抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位1(PGM1)

枯草芽孢桿菌白血病相關(guān)新基因抗體Anti-MUC1 Antibody(PB0154)葡萄糖磷變位(PGM2)

海仙菌屬鋅指蛋白307抗體Anti-MUC2 Antibody葡萄糖β(GUSβ)

神經(jīng)降壓受體3抗體糖蛋白95假百喉棒桿菌人宮頸癌組織源細胞

轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體檸檬色明串珠菌人皮膚癌組織源細胞

增食欲A/欲激A抗體有害片球菌人子宮癌組織源細胞

鋅指蛋白339抗體假腸膜明串珠菌腸人直腸癌組織源細胞
磷脂酶C抑制劑(D609)小麥曲根霉 2-乙基-4-甲基噻唑多殺巴斯德氏

桃殼囊孢 3-芐氧基苯過氧化脂質(zhì);乳過氧化物

小孢根霉華變種 6-甲氧基萘-2-抗角蛋白抗體

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞雙A甘油酯組4型受體

植物乳桿 1-溴-4-乙氧基-2,3-二氟苯半胱蛋白10

蘇云金芽孢桿九州亞種 3,5-二氟代苯(含有數(shù)量不等的酐)半胱蛋白13

蕈狀芽孢桿 4-Boc-1-哌乙四環(huán)

皺狀假絲酵母三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)釔(III)基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4

紡綞形賴芽孢桿六氟磷7-氮雜苯并三唑-1-氧基三(二甲氨基)磷(AOP)KLHL4

枯草芽孢桿六氟磷(7-氮雜苯并三唑-1-氧基)三吡咯烷磷凝血原

慢生根瘤 2-羥基乙基磺鈉過氧化3

解淀粉芽孢桿鈉三水合物水通道蛋白1

淡紫擬青霉順-二雙(三苯基膦)鉑(II), Pt min水通道蛋白2

竹瘤座 5-溴-2-水通道蛋白3

榛色假單胞 2-溴-1,3-二氟-5-苯水通道蛋白4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)