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PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 13:36:45瀏覽次數(shù):158次

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貨號 FS-X10723
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CDT(Human carbohydrate-deficient transferrin) ELISA Kit 人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白二二烯化 60%水溶液
Dsg-1(Human

中文名稱:PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)

英文名稱:Calyculin A

產(chǎn)品規(guī)格:0.5mM*20μL|0.5mM*50μL|0.5mM*200μL

貨號:FS-X10723

產(chǎn)品介紹:

Calyculin A有效抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)的催化亞基,IC50值為0.5-1nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:101932-71-2

別名:(-)-Calyculin A

純度:98.0%

分子量:1009.17

儲存條件:-20℃避光,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

糞腸球菌N-鈣粘附分子抗原Anti-DBF4 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)

黑木耳E-鈣粘附分子抗原Anti-DAPK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)

枯草芽孢桿菌去氧腎上腺Anti-DCLK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)

玫瑰色鏈霉菌神經(jīng)粘蛋白抗原Anti-DBI Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)

枯斑擬盤多毛孢2型神經(jīng)纖維瘤抗原Anti-DCLK2 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)

孟氏假單胞菌活化T核因子1蛋白Anti-DCLRE1B Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)

膠紅酵母磷化核因子/磷化k基因結合核因子抗原Anti-DCLRE1C Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)

猜也蓬小單孢菌核因子50/κ基因結合核因子50抗原Anti-DCT Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)

木耳神經(jīng)元3抗原Anti-DDB1 Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)

絲核菌屬鼻咽癌相關基因6(多肽)Anti-DDIAS Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)

虎皮香菇,漏斗香菇NIT2蛋白抗原Anti-DDB2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)

煙曲霉神經(jīng)激肽A抗原Anti-DCTN2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)

粉紅孢囊游動放線菌NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗原Anti-DDIAS Antibody人γ干擾(IFN-γ)

香菇*NK受體/自然殺傷活化性受體Anti-DDIT3 Antibody人γ干擾(IFN-γ)

北京鳥微菌腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗原Anti-DDX20 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)

科氏梭菌腫瘤抑制基因抗原Anti-DDX24 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)

P4501A2抗體紫紅曲霉小鼠白血病細胞

6磷果糖激2抗體紅曲霉人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞

蛋白激Cα抗體煙曲霉小鼠乳腺癌細胞

磷酯Cγ1抗體臭曲霉人肺腺癌細胞
PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)Sinomonas 4-三氟甲神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白

慢生根瘤 對三氟鈣衛(wèi)蛋白

黃青霉 4-氨基三氟甲苯S100鈣結合蛋白B

副球 4-三氟甲苯抗乙酰受體抗體

大腸埃希氏 1,9-二溴壬烷骨保護

香菇 1,8-二溴辛烷骨堿性磷

假單胞 3-三氟甲Dickkopf相關蛋白1

大毛霉 3-(三氟甲基)苯甲Dickkopf相關蛋白2

網(wǎng)孢麻孢 2--5-硝基吡啶骨鈣

橙蓋傘 2-溴-5-(三氟甲基)苯骨成型蛋白

中國油脂酵母 5-氟-2-層粘連蛋白

釀酒酵母 2--5-氟苯白介23

淡紫擬青霉 3-氟-4-白介27

葡萄座腔 4-氟-2-弓首蛔蟲病抗體

卵孢白僵 3,4-二甲基氟苯包蟲抗體

 


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