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貨號(hào)	FS-X10593

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：PI3K抑制劑(GSK2126458)

英文名稱(chēng)：GSK2126458

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10593

產(chǎn)品介紹:

GSK2126458是一種高選擇性，有效的PI3K抑制劑，抑制p110α/β/δ/γ，mTORC1/2的活性，Ki值分別為0.019nM/0.13nM/0.024nM/0.06nM和0.18nM/0.3nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1086062-66-9

別名：Omipalisib

純度：99.31%

分子量：505.5

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

谷棒桿菌分泌型白蛋白抑制因子抗體Anti-PRDX4 Antibody接觸蛋白3(CNTN3)

紙葡萄穗霉2，4-二氧乙(除草劑)單克抗體Anti-PRDX4 Antibody(PB0416)接觸蛋白2(CNTN2)

曲霉尿轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體Anti-PRDX3 Antibody(PB0349)接觸蛋白1(CNTN1)

美澳型核果褐腐病菌雌激誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)制器抗體Anti-PRDX5 Antibody酵母脫氫(SCCPDH)

短桿狀馬賽菌14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體Anti-PRDX5 Antibody(PB0417)窖蛋白3(CAV3)

南非諾卡氏菌2，4-二氧乙(除草劑)抗體Anti-PRF1 Antibody窖蛋白2(CAV2)

乳球菌屬5-羥色受體1A抗體Anti-PRDX6 Antibody(PB0350)窖蛋白(CAV1)

擬無(wú)枝菌5羥色抗體Anti-PRG2 Antibody角質(zhì)轉(zhuǎn)谷酰(TGM1)

泡盛曲霉5-羥色受體1B抗體Anti-PREB Antibody角鯊烯單加氧(SQLE)

黑曲霉神經(jīng)突觸2抗體Anti-PRKAB1 Antibody角膜蛋白(KERA)

熒光假單胞菌環(huán)指蛋白142抗體Anti-PRKAA1 Antibody角化粒(CDSN)

樹(shù)舌靈芝突觸結(jié)合蛋白3抗體Anti-PRKAB2 Antibody角化蛋白(CNFN)

蘇云金芽孢桿菌突觸相關(guān)蛋白25抗體Anti-PRKAR1A Antibody角化不良蛋白(DKC)

鐮刀菌因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體Anti-PRKCA Antibody角蛋白9(KRT9)

枯草芽孢桿菌超氧化物歧化1抗體(銅/鋅過(guò)氧化物歧化SOD)Anti-PRKCB Antibody角蛋白81(KRT81)

蟻巢傘屬超氧化物歧化2抗體Anti-PRKCA Antibody角蛋白8(KRT8)

神經(jīng)肽S受體1/G蛋白偶聯(lián)受體154抗體Microlunatusphosphovorus小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物

神經(jīng)調(diào)節(jié)肽S抗體蜂房類(lèi)芽孢桿菌小鼠膀胱成纖維細(xì)胞提取物

分子生物鐘調(diào)控蛋白NOC抗體唐菖蒲伯克霍爾德菌小鼠前列腺上皮細(xì)胞提取物

核受體0相關(guān)蛋白B家族2抗體變化考克氏菌小鼠膀胱上皮細(xì)胞提取物
PI3K抑制劑(GSK2126458)赭色栓 5-溴-2-甲氧基吡啶錳超氧化物歧化

枯草芽胞桿枯草亞種 3,5-二溴-2-羥基吡啶含錳核糖核還原

田無(wú)鏈霉 2-羥基-5-吡啶精

谷棒桿 2-甲氧基-3,5-二溴吡啶甘油二酯

頭狀禿馬勃化釔雙核精

綠黃鏈霉 2-羥基-4-脂多糖；內(nèi)

Aeromonas aquariorum 3--2-羥基吡啶磷化MEK1;2

林生毛霉硫釤(III)，八水合物磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激

美澳型核果褐腐病化釤,六水磷化絲裂原活化蛋白激1

密歇根棍狀桿標(biāo)記亞種溴化鎘,四水磷化真核起始因子結(jié)合蛋白1

甜菜慢生根瘤硫銦磷化含ETS域Elk1蛋白

枯草芽孢桿化鎳磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激1;2

枯草芽胞桿枯草亞種溴化鎳磷化絲裂原活化蛋白激
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)