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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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RSK2抑制劑(FMK)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-23 15:50:09瀏覽次數(shù):187次

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中文名稱:RSK2抑制劑(FMK)

英文名稱:FMK

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

貨號(hào):FS-X10920

產(chǎn)品介紹:

FMK是一種不可逆的RSK2抑制劑,能夠共價(jià)修飾RSK的C末端區(qū)域。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):821794-92-7

別名:RSK2 kinase inhibitor

純度:98.0%

分子量:342.37

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

嘴突凸臍蠕孢人內(nèi)Anti-ZNF18 Antibody小鼠小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)

李克犁頭霉人過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γAnti-ZNF227 Antibody小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)

美麗鹽單胞菌人環(huán)孢AAnti-ZNF232 Antibody小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)

大豆慢生根瘤菌人神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白Anti-ZNF23 Antibody小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

天藍(lán)色鏈霉菌人15脂加氧Anti-ZNF280A Antibody小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

曲霉人膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白Anti-ZNF24 Antibody小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

康寧木霉人白三烯C4Anti-ZNF280C Antibody小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

人色CAnti-ZNF292 Antibody小鼠少突膠質(zhì)髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

秦氏蜜環(huán)菌人脂蛋白脂Anti-ZNF329 Antibody小鼠少突膠質(zhì)髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)

豬布魯氏菌人糖原磷化同工IIAnti-ZNF287 Antibody小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)

釀酒酵母人糖原磷化同工MMAnti-ZNF337 Antibody小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)

釀酒酵母人糖原磷化同工BBAnti-ZNF384 Antibody小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)

Enterococcus faecium人脂蛋白αAnti-ZNF420 Antibody小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)

黃曲霉人骨膠原交聯(lián)Anti-ZNF397 Antibody小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)

白蠟多年臥孔菌人Ⅰ型前膠原C末端肽Anti-ZNF446 Antibody小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)

東方異擔(dān)子菌人脫氧吡啶/脫氧吡啶啉Anti-ZNF420 Antibody小鼠磷脂酰絲(PS)

氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成A1抗體粉肉色杯傘黑腹果蠅胚胎細(xì)胞

基丁轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VGAT抗體楊鏈格孢人表皮角質(zhì)細(xì)胞

線粒體外膜孔蛋白3抗體電壓依賴陰離子通道蛋白3穎苞莖點(diǎn)霉人腎小球系膜細(xì)胞

魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體馬勃狀硬皮馬勃猴腎細(xì)胞
RSK2抑制劑(FMK)菊異莖點(diǎn)霉 勞氏紫尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移

草木棲劍 總抗氧化能力

海唯鹽 4-松油超氧化物歧化

新城疫病 L-半乳糖

孢小克銀漢霉輪生變種 2′7′-二熒光二乙鹽氧化型

黃斑紅菇 6-羧基熒光二乙酯二

釀酒酵母 卡莫汀蛋白質(zhì)羰基

橙色微桿 無(wú)氨基酵母氮源(YNB)乙酰酯

弗氏檸檬桿 腺-5′-二磷鈉鹽溶

枯草芽孢桿 聚乳羥基乙共聚物5羥色

微球 聚乳羥基乙共聚物乙酰

威爾酵母 硫鏈絲ATP

枯草芽孢桿 2-(溴甲基)苯甲色氧化

深海微小桿 化銣抗肽


 


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