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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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H-89(PKA抑制劑)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-18 10:24:17瀏覽次數(shù):154次

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貨號(hào) FS-X10244
H-89(PKA抑制劑)正在熱銷的產(chǎn)品:IMP3/FITC 熒光標(biāo)記胰島樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體IgG鄰苯二紫 IND
ING1/p33/FITC 熒光標(biāo)記生長(zhǎng)抑制因子因1抗體IgGN-苯鄰氨苯(釩試劑) AR,95%
Inhibin Alpha/FITC 熒光標(biāo)記抑制α抗體IgG1-(2-吡啶偶氮)-2-萘 AR,90.0%
Inhibin BetaA/FITC 熒光標(biāo)記抑制

中文名稱:H-89(PKA抑制劑)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:1mg|5mg

貨號(hào):FS-X10244

產(chǎn)品介紹:

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:1mg|5mg

H89 2HCl 是一種有效的PKA 抑制劑,Ki 為48 nM,作用于PKA 比作用于PKG 選擇性高10倍,比作用于PKC, MLCK,鈣調(diào)蛋白激酶II 和酪蛋白激I/II 選擇性高500倍。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

密歇根克雷伯氏菌滋養(yǎng)層抗原3β7抗體Human SLC16A12 大鼠D-乳免疫試劑盒

平田頭菇熱休克蛋白-22抗體Human SLC16A3 大鼠D-甘油3-磷免疫試劑盒

硒砷芽孢桿菌組織H4受體抗體Human SLC16A2 大鼠D二聚體(D2D)免疫試劑盒

裴氏著色霉羥基類固脫氫11β2抗體Human SLAMF7 大鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)免疫試劑盒

釀酒酵母組織H3受體抗體Human SLC10A3 大鼠C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒

瑞山海源菌磷化組蛋白H1抗體Human SLC12A2(Solute carrier family 12 member 2) 大鼠C肽(C-Peptide)免疫試劑盒

圍小叢殼扁圓變種HEATR4蛋白抗體Human SLC12A4 大鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒

栗疫菌透明質(zhì)及粘蛋白1抗體Human SIX4 大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)免疫試劑盒

新城疫病轉(zhuǎn)錄因子HES7抗體Human SIX2 大鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)免疫試劑盒

尖鐮孢古巴?;蛯m頸黏液蛋白相關(guān)蛋白抗體Human SLC13A4 大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)免疫試劑盒

玫瑰色紅球菌流感病H3N8血凝抗體Human SKAP2 大鼠c-ros致癌基因1,受體酪激(ROS1)免疫試劑盒

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌流感病H3N7血凝抗體Human SIX5 大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)免疫試劑盒

Rhizobium multihospitium流感病H3N1血凝抗體Human SKIL 大鼠c-jun 免疫試劑盒

黑曲霉同源盒蛋白HoxB3抗體Human SIX4 大鼠c-fos 免疫試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌 D型遺傳性血色病蛋白相關(guān)蛋白1抗體Human SIX5 大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-磷3磷脂酰轉(zhuǎn)移,線粒體(PGS1)免疫試劑盒

紋黑蛋巢甘油吸收/轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GUP1抗體Human SKAP2 大鼠CDCP1 免疫試劑盒

涅斯捷連科氏菌Nesterenkonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%科羅索

枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%草質(zhì)

芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%異鼠李-3-O-葡萄糖
H-89(PKA抑制劑)枯草芽胞桿 3-氨基-4-氟甲酯ERp57

枯草芽孢桿 2-氟脂褐

大孢鏈霉 5-降烯-2,3-二羧一甲酯心型脂肪結(jié)合蛋白

近弧狀短波單胞 鉛(II)BPDE-DNA加合物

根瘤 1--3-乙氧基烷周期依賴性激2

秦氏蜜環(huán) 順-4-氨基環(huán)己烷甲可溶性β淀粉樣蛋白

鏈球?qū)?/span> 4-氨基-3-溴喹啉不可溶性β淀粉樣蛋白

艱難鏈霉 3-氧代-3,4-二氫-2-喹喔啉甲乙酯雷帕霉靶蛋白

紅球 4-氨基鄰苯二甲酰亞單氧化B

大腸埃希 4-氟-1,2-苯二腸道病71型IgG抗體

唐菖蒲伯克霍爾德氏 6--1,2,3,4-四氫咔唑蛋白酪磷抗體

尾孢屬 2--3,5-二氟苯甘油磷

釀酒酵母 3-氨基-5-甲基己過(guò)氧化氫

小鏈霉(小諾卡氏) N-(2,3,4-三氟苯)乙酰苯抗雙鏈DNA-IgG抗體

總狀橫梗霉 陽(yáng)離子桃紅FG抗雙鏈DNA-IgM抗體

 


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