當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> tubulin抑制劑(Mertansine)
貨號 | FS-X10420 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Mertansine 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg Mertansine是一個tubulin抑制劑,能夠通過綁定tubulin抑制微管蛋白的組裝。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:139504-50-0 別名:DM1;Maytansinoid DM1 純度:98.51% 分子量:738.29 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Mertansine
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10420
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
桿狀毛霉泛甲基賴抗體Anti-BCL2L1 Antibodyβ連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)
囊軸發(fā)仙菌囊軸亞種核糖體p70 S6蛋白激抗體Anti-BCL2L1 Antibodyβ-連環(huán)蛋白(CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286)
微菌核鏈霉菌p53調(diào)節(jié)凋亡誘導(dǎo)蛋白1抗體Anti-BCL2L1 Antibody(PB0964)β膠原交聯(lián)(bCTx)
須芒草伯克霍爾德氏菌Bcl-2轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體Anti-BCL2L2 Antibodyβ-肌動蛋白(β-actin)
樣品粉碎機(jī)磷脂爬行3抗體Anti-BCL6 Antibodyβ-黑色激(β-MSH)
產(chǎn)紫青霉骨骼肌線粒體膜蛋白PARL抗體Anti-BCL9L Antibodyβ黑色激(β-MSH)
大腸埃希菌多核磷化蛋白抗體Anti-BCRP/ABCG2 Antibodyβ干擾(IFN-β/IFNB)
蘑菇胃腸道相關(guān)酪激抗體(蛋白酪激5)Anti-BDH1 Antibodyβ甘露糖(β Manase)
Burkholderia anthinaPEST含核蛋白抗體Anti-BCMA/Tnfrsf17 Antibodyβ-防御3(β-BD-3)
枯草芽胞桿菌磷化p53結(jié)合蛋白1抗體Anti-BDKRB2 Antibodyβ-防御2(β-BD-2)
枯草芽孢桿菌蛋白磷2Cα抗體Anti-BCR Antibodyβ防御2(β-BD-2)
大孢鏈霉菌磷化樁蛋白Paxillin抗體Anti-BDNF Antibodyβ防御104(DEFB104A)
弧狀短波單胞菌神經(jīng)胞漿蛋白9.5抗體(蛋白基因產(chǎn)物9.5)Anti-BDNF Antibody(PB0013)β防御1(DEFB1)
根瘤菌磷化蛋白激Aβ抗體Anti-BECN1 Antibodyβ防御(β-Defensin)
秦氏蜜環(huán)菌蛋白激A受體2α亞基抗體Anti-BEST1 Antibodyβ淀粉樣前體蛋白(β-APP)
鏈球菌屬磷化蛋白激A受體2α亞基抗體Anti-BECN1 Antibody(PB0014)β淀粉樣多肽42(Aβ 42)
惡臭假單胞菌Pseudomonas│putida 質(zhì)量規(guī)格:>99%(T),標(biāo)準(zhǔn)品
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
蟬花1-8Isaria│cicadae Miq. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
tubulin抑制劑(Mertansine)小角狀節(jié)皮 4-溴-2-甲氧基苯甲三磷腺
金黃桿屬 6--3-甲基鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3
空腸彎曲桿 4,6-二-5-甲基嘧啶氫離子;肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1
斯氏油脂酵母 Z-Phe-Leu溶質(zhì)載體家族39成員4
分枝節(jié)桿 反,反-2,4-庚二烯溶質(zhì)載體家族39成員5
pGAPZB 4-叔丁基苯甲酰肼胃蛋白原
焦曲霉 2-氨基-4-甲基噻吩-3-羧乙酯β肌動蛋白
潘泰萊里亞島鹽單胞 -15N2色
膠孢 硫-15N2磷化微管相關(guān)蛋白
寡養(yǎng)單胞 2-乙炔噻吩11β羥類固脫氫2型
其他質(zhì)粒 2-氨基-4-甲氧基磷
橄欖產(chǎn)色鏈霉 5-氨基-2,3-二氫苯并[b]呋喃蛋白激G
蠟樣芽孢桿 4-(二對甲苯氨基)苯甲肉
梭狀芽孢桿 (S)-(-)-1, 2, 4-丁三葡萄糖-6-磷脫氫
釀酒酵母 2-溴-5-甲轉(zhuǎn)酮
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