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貨號	FS-X10938

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：FRAX486是group I PAKs有效抑制劑

英文名稱：FRAX486

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10938

產品介紹:

FRAX486是group I PAKs有效選擇性抑制劑，對PAK1、PAK2和PAK3的IC50值分別為8.25nM、39.5nM和55.3nM，對PAK4的抑制力弱（IC50=779nM）。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1232030-35-1

純度：98.0%

分子量：513.39

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

洋蔥伯克霍爾德菌人水通道蛋白2Paenibacillus mucilaginosus小鼠胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)

紫皮麗菇人水通道蛋白1Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)

豬鏈球菌分型血清參考品血清型 SS12人水通道蛋白0Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)

釀酒酵母人類風濕因子Bacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)

桑樹枝枯病人抗鏈球菌溶血O/抗OBacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)

拜耳接合酵母人腎上腺皮質抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)

鏈格孢人抗腎小球基底膜抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)

熒光假單胞菌人β2微球蛋白Bacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)

枯草芽孢桿菌人膜聯(lián)蛋白ⅤBacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)

毛栓菌人抗腎小管基底膜抗體Bacillus niacini小鼠白介-5(IL-5)

橄欖灰鏈霉菌人apelin 13Bacillus oleronius小鼠白介-5(IL-5)

根霉人Apelin 36Bacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)

新月彎孢人肌鈣蛋白TBacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)

巴氏醋桿菌人血管內皮抑抗體Bacillus pseudofirmus小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

奇異球菌屬人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型Sporosarcina psychrophila小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

球孢白僵菌人血管生成樣蛋白3Bacillus psychrosaccharolytic小鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)

鋅指蛋白263抗體梨干枯擬莖點菌大鼠心肌細胞

鋅指蛋白195抗體丁香絲膜菌人的腎小球內皮細胞

鋅指蛋白266抗體栓黑管菌小鼠腎足細胞

鋅指蛋白786抗體稻平臍蠕孢(斜面)人支氣管上皮細胞
FRAX486是group I PAKs有效抑制劑釀酒酵母碳錳胰島

凝結芽孢桿硫錳胰島樣生長因子1

擬莖點霉硬脂鈣胰島樣生長因子2

乳乳球霍氏亞種草鈣胰島樣生長因子結合蛋白-1

球蓋蟻巢傘乙鈣胰島樣生長因子結合蛋白-3

宇佐美曲霉無水硫鈣胰高血糖

Kocuria polaris 硫鈣乙酰CoA羧化

冬蟲夏草焦磷鈣乙酰CoA羧化α

金針菇磷三鈣乙酰CoA羧化β

枯草芽孢桿磷二氫鈣異檸檬脫氫

根瘤過磷鈣硬脂酰去飽和1

枯草芽孢桿枯草亞種氫氧化鈣游離膽固

硬水黃桿碳鈣孕酮

香草蘭根疾磷氫鈣脂蛋白脂

赤紅球二甲基亞砜脂肪甘油三酯脂
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)