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MEK小分子抑制劑(CI-1040)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 14:12:10瀏覽次數(shù):197次

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貨號 FS-X10764
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中文名稱:MEK小分子抑制劑(CI-1040)

英文名稱:CI-1040

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg

貨號:FS-X10764

產(chǎn)品介紹:

CI-1040(PD184352)是高度特異的MEK小分子抑制劑,對MEK1的IC50值為17nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:212631-79-3

別名:PD 184352

純度:99.72%

分子量:478.66

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

新月彎孢Anti-HNRNPA0 pAb人抗肌動蛋白抗體(AAA)

長孢鏈霉菌Anti-hnRNP L Antibody人抗肌動蛋白抗體(AAA)

黃絮鱗鵝膏菌Anti-HNRNPD Antibody人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)

運動替斯崔納菌Anti-HNRNPC Antibody人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)

水棲黃桿菌Anti-HNRNPD Antibody人蛋白3抗體(PR3Ab)

檸檬色短小桿菌Anti-HNRNPD(AUF1) pAb人蛋白3抗體(PR3Ab)

葡萄座腔菌Anti-HNRNPM Antibody人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)

緣彎孢Anti-HNRNPH1 Antibody人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)

木糖氧化無色桿菌Alexa Fluor 350標記兔IgG(流式同型對照)Anti-HNRNPH2 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG

牛病性腹瀉病熒光Cy3標記兔抗FITCAnti-HNRNPLL Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG

異常漢遜酵母熒光PE-Cy3標記小鼠IgG(流式同型對照)Anti-HORMAD1 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG

枯草芽孢桿菌熒光PE-Cy3標記羊IgG(流式同型對照)Anti-HNRNPUL2 Antibody人β乳糖蛋白抗體IgG

球形芽胞桿菌熒光Cy3標記羊抗人IgAAnti-HNRNPUL2 Antibody人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)

多主葡萄殼菌Alexa Fluor 350標記羊IgG(流式同型對照)Anti-HOXA7 Antibody人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)

土曲霉Alexa Fluor 350標記大鼠IgG(流式同型對照)Anti-HNRPLL Antibody人抗糖蛋白抗體(GP)

伊氏利斯特氏菌生物標記牛血清白蛋白Anti-HOXB1 Antibody人抗糖蛋白抗體(GP)

PSD95結(jié)合蛋白2抗體產(chǎn)黃青霉人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞

PSD95結(jié)合蛋白4抗體阿達青霉人胰腺癌細胞系

SCK蛋白抗體棉鈴蟲擬青霉大鼠甲狀腺細胞

神經(jīng)組織特異性F肌動蛋白結(jié)合蛋白2抗體玫煙色擬青霉彌漫大B細胞淋巴瘤細胞
MEK小分子抑制劑(CI-1040)韋斯特迪克氏曲霉 RV肉湯雌二

腐爛粘束梗霉 瓊脂培養(yǎng)基N(溴化十六烷基三瓊脂)黃體生成

樟疫霉 溴化十六烷基三瓊脂孕酮

球孢白僵 檢定培養(yǎng)基1號(高PH)促卵泡

產(chǎn)氨短桿 D-阿洛糖雌二

弓形蟲(RH株) 支原體瓊脂培養(yǎng)基睪酮

新城疫病 麥康凱肉湯催乳

長柄條孢牛肝 BBL液體培養(yǎng)基乳糖

黑曲霉 GN糜蛋白

大腸埃希氏 1-甲酰胰蛋白

香菇 蛋白胨緩沖液顆粒酪蛋白αs1

木耳屬 MLCB寒天培地顆粒酪蛋白β

丁香假單胞 瓊脂培養(yǎng)基F(紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂)κ酪蛋白

構(gòu)巢曲霉 腸道富集肉湯培養(yǎng)基(USP)雌

靈芝屬 (S)-(+)-1-苯基-1,2-乙二促腎上腺皮質(zhì)

 


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