當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PI3K p110β抑制劑(TGX-221)
貨號 | FS-X10936 |
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英文名稱:TGX-221
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10936
產(chǎn)品介紹:
TGX-221是一種高效的、選擇性的、細胞膜滲透的PI3K p110β抑制劑,常用于癌癥治療。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:663619-89-4 純度:99.78% 分子量:364.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
鏈霉菌人前列腺性磷Bacillus megaterium小鼠戊糖(Pentosidine)
乳桿菌屬人前列腺D合成Bacillus megaterium小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)
鏈霉菌人胃蛋白原CBacillus megaterium小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)
松針層孔菌人胃蛋白原ABacillus megaterium小鼠中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)
枯草芽孢桿菌人尿激型纖溶原激活物受體Bacillus megaterium小鼠中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)
球孢白僵菌人尿激型纖溶原激活物Bacillus megaterium小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)
亞側(cè)耳人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2Bacillus megaterium小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)
假單胞菌屬人基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原Bacillus megaterium小鼠多巴D1受體(D1R)
Paenibacillus人基質(zhì)金屬蛋白7Bacillus megaterium小鼠多巴D1受體(D1R)
人基質(zhì)金屬蛋白3Bacillus megaterium小鼠腎上腺能a1A受體(ADRA1A)
蘭鏈霉菌人基質(zhì)金屬蛋白2/明膠ABacillus megaterium小鼠腎上腺能a1A受體(ADRA1A)
蠟狀芽孢桿菌人基質(zhì)金屬蛋白13Bacillus megaterium小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)
谷棒桿菌人基質(zhì)金屬蛋白Bacillus megaterium小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)
少根根霉人基質(zhì)金屬蛋白1Bacillus megaterium小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)
丁梭菌人FMS樣酪激3Bacillus megaterium小鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白(HABP)
枯草芽孢桿菌人FMS樣酪激3配體Bacillus megaterium小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
鋅指蛋白672抗體灰青霉涎腺腺樣囊性癌細胞
鋅指蛋白852抗體四孢菇小鼠顱頂前骨細胞亞克14
鋅指蛋白281抗體桿菌狀鏈霉菌人胃粘膜上皮細胞
鋅指蛋白274抗體炭疽刺盤孢菌人胚肺成纖維細胞
PI3K p110β抑制劑(TGX-221)龍勝鏈霉 對異基苯神經(jīng)肽Y
植物乳桿 糖精生長促乳
Aurantimonas altamirensis 二十五烷生長
腸桿 二苯硫生長受體
牛絲膜 十六烯生長抑
淺黃色假單胞 乙烯硫脲瘦
釀酒酵母 4,4'-二二苯甲酮絲蛋白
云芝栓孔(變色栓) D-異抗壞血性磷
灰略紅鏈霉 鄰苯二甲丁芐酯糖原合成
黑附球 鄰三聯(lián)苯糖原合成激
香栓孔 分散橙糖原磷化
擬蠶豆葡萄孢 螺旋霉天門冬氨基轉(zhuǎn)移
Carnobacterium 4,4'-二氨基二苯砜脫
突孢毛殼
假單胞屬 4-羥基苯甲脫2
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