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貨號(hào)	FS-X10761

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：mTOR抑制劑(KU-0063794)

英文名稱：KU-0063794

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10761

產(chǎn)品介紹:

KU-0063794是一種有效的，特異性的mTOR抑制劑，能夠抑制mTORC1和mTORC2，IC50值均約為10nM；對(duì)PI3Ks無(wú)作用。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：938440-64-3

純度：99.23%

分子量：465.54

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

芽孢桿菌青霉G偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-HDAC-4(internal) Antibody人抗BB抗體(BB-Ab)

雜色曲霉青霉G偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-HDAC-9(internal) Antibody人抗BB抗體(BB-Ab)

嗜鹽長(zhǎng)單胞菌陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗原Anti-HCK Antibody人抗平滑肌抗體(ASMA)

多主枝孢Anti-HDAC1 Antibody人抗平滑肌抗體(ASMA)

淡紫灰鏈霉菌Anti-HDAC2 Antibody人抗肝膜抗體(LMA)

枯草芽孢桿菌Anti-HDAC1 Antibody人抗肝膜抗體(LMA)

黃褐環(huán)銹傘Anti-HDAC4 Antibody人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)

大腸埃希氏菌Anti-HDAC10 Antibody人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)

釀酒酵母Anti-HDAC5 Antibody人抗眼肌抗體(EMAb)

鹽田鹽單胞菌Anti-HDAC5 Antibody人抗眼肌抗體(EMAb)

大豆慢生根瘤菌Anti-HDAC5 Antibody人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)

黃曲霉Anti-HDAC7 Antibody人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)

大腸埃希菌?；桥悸?lián)牛血清白蛋白（β-基乙磺）Anti-HDGFL3 Antibody人抗內(nèi)因子抗體(IFA)

赭色栓菌熒光Cy5標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HELZ2 Antibody人抗內(nèi)因子抗體(IFA)

枯草芽胞桿菌枯草亞種熒光Cy5.5標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HES2 Antibody人抗磷脂抗體(Apl/APA)

田無(wú)鏈霉菌熒光Cy3標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-HEXIM1 Antibody人抗磷脂抗體(Apl/APA)

唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集1抗體根霉屬的菌人胎盤絨膜癌細(xì)胞

溶質(zhì)載體蛋白家族35成員C2抗體中國(guó)臺(tái)灣根霉人子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞

轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體華根霉人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞

神經(jīng)元電壓門控鈉通道蛋白β2/Na+CPtypeIIβ抗體少根根霉人結(jié)直腸腺癌瘤株
mTOR抑制劑(KU-0063794)枯斑擬盤多毛孢大腸桿噬體MS2液體培養(yǎng)基腫瘤壞死因子α

土曲霉大腸桿噬體MS2半固體培養(yǎng)基白介6

藤黃微球革蘭氏陽(yáng)性增液白介17

耐寒短桿 3--4-氟γ干擾

枯草芽孢桿 GAD培養(yǎng)基白介2

蘭小菇陰溝腸桿分離瓊脂（ECIA）I型前膠原羧基端肽

腸膜明串珠 SBG增液骨鈣

枯草芽孢桿 BCP寒天培地（含瓊脂）骨堿性磷

毛柄(金針菇) 大豆胨酵母浸粉瓊脂（PYE）I型原膠原N端前肽

松口蘑新胭脂紅白介1

耐熱芽胞芽胞桿利茲不動(dòng)桿培養(yǎng)基胰島

嘴突凸臍蠕孢革蘭氏陰性增液C-反應(yīng)蛋白

李克犁頭霉卻普曼瓊脂程序性死亡分子-1

美麗鹽單胞六氟銻銀輪狀病

大豆慢生根瘤營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂（AATCC30）程序性死亡配體-1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)