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貨號(hào)	FS-X11034

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：CK1δ/CK1抑制劑(SR-3029)

英文名稱：SR-3029

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號(hào)：FS-X11034

產(chǎn)品介紹:

SR3029是一個(gè)強(qiáng)且有特異性CK1δ/CK1的抑制劑，IC50值是97nM.

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1454585-06-8

純度：98.89%

分子量：480.45

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

釀酒酵母Halorubrum trapanicum大鼠維生C(VC)

盤孢屬Natrialba asiatica大鼠維生B6(VB6)

斑褶菇*Bifidobacterium longum subsp. infantis大鼠維生B6(VB6)

奧氏蜜環(huán)菌Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)

暗褐色毛霉Halorubrum sodomense大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)

巨大芽孢桿菌 AAeromonas veronii大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)

泰國(guó)考克娃酵母Bifidobacterium bifidum大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)

地衣芽孢桿菌Propionibacterium acidipropionici大鼠可溶性P選擇(sP-selectin)

枯草芽孢桿菌Bifidobacterium breve大鼠可溶性P選擇(sP-selectin)

三葉草根瘤菌Bifidobacterium animalis subsp. lactis大鼠S0蛋白(S-0)

干酪棒桿菌Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii大鼠S0蛋白(S-0)

鞘盒菌屬Propionibacterium thoenii大鼠S0B蛋白(S-0B)

巴氏金桿菌Propionibacterium jensenii大鼠S0B蛋白(S-0B)

龜裂鏈霉菌龜裂亞種Propionibacterium acidipropionici大鼠白介1(IL-1)

大腸埃希氏菌Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii大鼠白介1(IL-1)

大豆慢生根瘤菌Propionibacterium acidipropionici大鼠白介1β (IL-1β)

Rad51抗體肺形側(cè)耳柔嫩艾美耳球蟲

R-鈣粘附分子抗體鳳尾菇毒害艾美耳球蟲廣東株

急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體糙皮側(cè)耳(平菇)牛葡萄球菌

根蛋白抗體長(zhǎng)根奧德蘑Fusarium moniliforme
CK1δ/CK1抑制劑(SR-3029)異常威克漢姆酵母鳳仙萜四K

水叢毛單胞矢車菊黃

節(jié)狀鐮孢厚垣變種甲基條葉薊; 澤蘭黃

拜科羅爾紅球馬兜鈴內(nèi)酰A

庫(kù)爾勒海洋桿齒孔; 齒孔

乳桿屬三七

*蛹蟲草 20R-人參皂Rg2

植物乳桿丹參酮甲酯

枯草芽孢桿 1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酯

草莖點(diǎn)霉去氫紫堇堿

構(gòu)巢裸胞殼去氫海堿

假單胞酰D

蘋果黑腐皮殼齊墩果3-O-beta-D-葡吡喃糖基(1→2)-alpha-L-吡喃阿拉伯糖

狐糞青霉一枝蒿庚；準(zhǔn)葛爾

毛頭鬼傘（雞腿蘑）次皂甙元CP6
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)