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貨號(hào)	FS-X10445

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：MEK1和MEK2抑制劑

英文名稱：Trametinib DMSO solvate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10445

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Trametinib DMSO solvate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

Trametinib DMSO solvate是一種有效的MEK1/2抑制劑，特異性抑制MEK1/2，IC50約為2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1187431-43-1

別名：GSK-1120212 DMSO solvate;Trametinib;JTP-74057;GSK1120212

純度：98.53%

分子量：693.53

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

凍土毛霉纖維蛋白溶原抗體Anti-CDC42 Antibody1,3-二磷甘油(1,3-DPG)

鞘盒菌DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體Anti-CDC42 Antibody1,3-βD葡葡糖(1,3-βD-Glu)

宛氏擬青霉蛋白質(zhì)精甲基轉(zhuǎn)移1抗體Anti-CDC5L Antibody1,25二羥基維生D3(1,25(OH)2D3/DVD/DHVD3)

樺剝管孔菌色P450 1A2抗體Anti-CDC45 Antibody1,25二羥基維生D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)

砂單胞菌磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDC6 Antibody1,25二羥基維生D3(1,25 DHVD3)

耐寒短桿菌磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDCP1 Antibody組織蛋白B(CTSB)

粘紅酵母磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDC73 Antibody質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)

紅球菌磷化絲/蘇蛋白激Plk1抗體Anti-CDC6 Antibody脂氧合同工1(LOX-1)

白色短波單胞菌磷化多聚合激3磷化抗體Anti-CDC6 Antibody(PB0560)脂聯(lián)(human adiponectin)

梭菌突觸后密度蛋白93抗體Anti-CDH1 Antibody脂聯(lián)(Adiponectin/Acrp30)

燕麥鐮孢磷化突觸后密度蛋白93抗體Anti-CDH1 Antibody(PB0583)脂聯(lián)(Adiponectin,Acrp30)

短密青霉磷化突觸后密度蛋白95抗體Anti-CDH17 Antibody脂聯(lián)(Adiponectin)

雞樅(雞菌）磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體Anti-CDH2 Antibody脂聯(lián)(Acrp30)

枯草芽孢桿菌磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體Anti-CDH5 Antibody脂肪合成(FAS)

釀酒酵母樁蛋白Paxillin抗體Anti-CDH23 Antibody胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7(IGFBP-7)

苛求芽孢桿菌磷化樁蛋白Paxillin抗體Anti-CDH5 Antibody胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)

金黃殼囊孢Cytospora│chrysosperma (Pers.) Fr. 質(zhì)量規(guī)格：0.98

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

鐮孢屬菌種Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：0.98
MEK1和MEK2抑制劑產(chǎn)阿拉伯糖漢遜酵母多球殼3氧代5α類固4脫氫2

釀酒酵母 2,8-雙(三氟甲基)-4-羥基喹啉類固5α還原1

大腸埃希氏 2-溴苯甲二乙縮肌激同工MB

戴爾根霉 4,5-二甲基噻唑鈣調(diào)神經(jīng)磷

豇豆慢生根瘤 5-甲基噻唑中性粒趨化因子1

復(fù)輪生小克銀漢霉 2-溴-4-氟吡啶內(nèi)皮特異性分子

馬鏈球馬亞種 4-叔丁基苯戊肝抗原b5

大腸埃希氏 N,N-二甲基間苯二,內(nèi)源性類洋地黃因子

變幻青霉 Fmoc-beta-促性腺平抑因子

腸桿屬 7--1H-吡咯[2,3-C]吡啶抗聚角蛋白微絲蛋白抗體

枯草芽孢桿硝鐿絲聚合蛋白

鉤狀木霉 Pemetrexed disodium hydrate類風(fēng)濕因子抗體

假單胞 PCB No.30低糖基化IgA1

*櫻桃鏈格孢 PCB No.30半乳糖缺乏IgA1

紅硬囊果青霉 N-Z-L-Homoserine lactone球蛋白A1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)