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貨號(hào)	FS-X10289

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：MST1和MST2抑制劑(XMU-MP-1)

英文名稱(chēng)：XMU-MP-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

貨號(hào)：FS-X10289

產(chǎn)品介紹:

英文名稱(chēng)：XMU-MP-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

XMU-MP-1是可逆選擇性的MST1/2抑制劑，對(duì)MST1和MST2的IC50值分別為71.1和38.1nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：2061980-01-4

純度：99.34%

分子量：416.48

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

雅致小克銀漢霉基末端激3抗體Human PRTFDC1 胰島受體β(ISR-β)

黃柄曲霉磷化活化蛋白激B抗體Human PRRT1 胰島受體α(INSRA)

棲土曲霉JmjC結(jié)構(gòu)域組蛋白去甲基化H3-K36抗體Human PSMA1 胰島生長(zhǎng)因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)

黑化鏈霉菌組蛋白去甲基化JARID2抗體Human PRPF8 胰島生長(zhǎng)因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)

環(huán)帶毛霉JAK和微管相互作用蛋白2抗體（JAK和微管相互作用蛋白2）Human PRUNE 胰島抗體(Anti-Ins)

麥芽糖假絲酵母活化蛋白激B抗體Human PRPH2 胰島降解(IDE)

分枝枝頂孢磷化蛋白酪激JAK-2抗體Human PRPSAP2 胰島(INS)

芽孢桿菌凋亡清除受體抗體Human PRPS1L1 胰島淀粉樣多肽(IAPP)

彎孢菌磷化原癌基因c-Jun抗體Human PRPS1 原激活肽(TAP)

副豬嗜血桿菌Notch配體Jagged 2蛋白抗體Human PRR13 原Ⅱ(Try-Ⅱ)

雪腐鐮孢組蛋白去甲基化Jarid1C抗體Human C13orf33(Uncharacterized protein C13orf33) (trypsin)

香港科恩氏菌組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移JMJD1B抗體Human PRUNE 衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)

可可鏈霉菌可可亞種親聯(lián)蛋白2抗體Human PRPF8 一氧化碳血紅蛋白(HbCO)

地衣芽胞桿菌驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白13B抗體Human PRPH2 一氧化化氮(NO)

蘇云金芽胞桿菌日本亞種驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白7抗體Human PRMT6 一氧化氮合(NOS)

地生翅孢殼CREB結(jié)合蛋白抗體Human PRMT8 一氧化氮合成(NOS)

芒弗里亞擬盤(pán)多毛孢Pestalotiopsis│mangifolia 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)(T)馬錢(qián)

光神農(nóng)球菌Agrococcus│baldri 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)蝙蝠葛堿

新月彎孢Curvularia│lunata 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記濱蒿內(nèi)酯
MST1和MST2抑制劑(XMU-MP-1)大腸埃希氏對(duì)氧基肉桂血纖蛋白

蠟狀芽孢桿天門(mén)冬含NLR家族CARD域蛋白4

母雞乳桿己烯雌（順?lè)串悩?gòu)混合物）血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3

三葉草根瘤 1-甲基-4-羧血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1

芽孢桿屬異基化磷三苯酯CpG寡脫氧核

香菇次卟啉透明質(zhì)1

白曲霉 N-(1-甲基基)脲透明質(zhì)1

小麥莖點(diǎn)霉 2-氟-4-羥基透明質(zhì)2

地衣芽胞桿對(duì)溴鄰甲骨成型蛋白5

膠孢 4-甲氧基-3-甲激活受體ⅡA

四季腐霉洛索洛芬半乳糖

膠質(zhì)芽孢桿(沒(méi)有可以提供的） D-焦谷乙酯甘露糖

香菇 2-甲基啉TNNI3

根霉 3,5-二苯頻哪酯TNNI3
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)