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蛋白磷酸酶2A抑制劑(LB-100)

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更新時間:2022-05-18 14:05:18瀏覽次數(shù):205次

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貨號 FS-X10431
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中文名稱:蛋白磷酸酶2A抑制劑(LB-100)

英文名稱:protein phosphatase 2A

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10431

產(chǎn)品介紹:

英文名稱:protein phosphatase 2A

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

LB-100是一種水溶的蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase2A)抑制劑,在BxPc-3和Panc-1細胞中,IC50值分別為0.85μM和3.87μM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:1632032-53-1

純度:98.0%

分子量:268.31

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

杜鵑尾孢菌p19ARF抑癌基因抗體Anti-CAV3 AntibodyL解(PAL)

施氏假單胞菌p21蛋白抗體Anti-Caveolin-2/CAV2 AntibodyL-基氧化(LAO)

釀酒酵母P2Y1受體抗體/受體抗體Anti-CAV1 Antibody(PB0107)KI-67抗原(Ki-67)

雞痘病神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體Anti-CBFB AntibodyJo1抗體/抗組酰tRNA合成抗體(Jo1/HRS)

食品安全快速檢測箱 精簡配置絲裂原活化蛋白激p38α抗體Anti-CBR1 AntibodyIV形膠原蛋白α3鏈(COL4A3)

鮑曼不動桿菌促尿鈉排泄肽前體C抗體Anti-CBL AntibodyIPO-38蛋白(IPO38)

細疣籃狀菌磷脂磷2C抗體Anti-CBS AntibodyIgγ3鏈C區(qū)(IGHG3)

粘孢白僵菌配對盒基因1抗體Anti-CBL AntibodyICOS配體(ICOSLG)

尖孢鐮孢配對盒基因2抗體Anti-Cbx8 AntibodyICE蛋白激活因子(IRAP)

可可里亞鎮(zhèn)小鏈孢菌p21激活激2抗體Anti-CCDC6 AntibodyI 型膠原蛋白(COL I)

火紅色紅曲菌磷酯Cβ3抗體Anti-CBS AntibodyH-鈣粘著蛋白/H-鈣粘連蛋白(H-Cad/CDH13)

Marisediminicola磷化星形膠質(zhì)PEA15抗體Anti-CBX3 AntibodyG蛋白偶聯(lián)受體152(GPR152/PGR5)

裂褶菌磷化星形膠質(zhì)PEA15抗體Anti-CCDC36 AntibodyG蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)

短桿狀馬賽菌廣譜角蛋白PCK抗體Anti-CCKBR AntibodyG蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)

西奈青霉果膠抗體Anti-CCKBR AntibodyG蛋白偶聯(lián)雌激受體1(GPR30)

抗輻射鏈霉菌PRPF4蛋白抗體Anti-CCKBR AntibodyG蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:99%,BR

芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.99

華癸中間根瘤菌Mesorhizobium│huakuii 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR
蛋白磷酸酶2A抑制劑(LB-100)扇形側(cè)耳 L-異酯鹽鹽谷NMDA受體epsilon-2亞基

粉紅擲孢酵母 4,4'-二氟聯(lián)苯谷NMDA受體epsilon-1亞基

慢生根瘤 Penciclovir5-羥色受體2C

總狀橫梗霉 4--1-甲基-1H-吡唑5-羥色受體2A

人蒼白桿 4-叔丁基吡啶乙酰轉(zhuǎn)移

芽孢桿 2-羥基-6-甲基-3-硝基吡啶乙酰酯

蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 L-谷氨酰叔丁酯鹽鹽脫氧核糖核Ⅰ

乳微桿 2-代芐硫核糖核H

黃河張比齊奧氏 薄荷酰胰蛋白

生活飲用水   2--3-硝苯胰凝乳蛋白

黑曲霉 4-溴喹啉激肽釋放

釀酒酵母 6-氟喹啉血纖維蛋白溶解

半園田頭菇 2-硝基溴化芐鞘脂激活蛋白原

雞傷門氏 3-硝基芐溴鞘磷脂

 


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