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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Aurora A抑制劑(Alisertib)
貨號(hào) | FS-X10320 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Alisertib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Alisertib是一種具有選擇性的Aurora A抑制劑,IC50值為1.2nM,對(duì)Aurora A的選擇性高于Aurora B。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1028486-01-2 別名:MLN 8237 純度:99.43% 分子量:518.92 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Alisertib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10320
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
多主葡萄殼菌低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體Human OVCA1 嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員12(EAR12)
變異鏈霉菌磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體Human OVOL1 嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員1(EAR1)
明尼蘇達(dá)被毛孢磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體Human OXA1L 嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)
雙孢蘑菇蘇蛋白激LKB1抗體Human Osteoglycin 嗜環(huán)蛋白/親環(huán)B(CyPB)
白地霉低分子量蛋白7抗體Human HABP1/C1QBP(Hyaluronan Binding Protein 1) 嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
郝氏鏈霉菌脂肪瘤相關(guān)蛋白抗體Human OXA1L 嗜鉻蛋白A(CgA)
嗜肉考克氏菌層粘連蛋白β4抗體Human OSTF1 嗜肺軍團(tuán)菌抗原(LP Ag)
巴氏梭菌黃體激釋放激/促性腺激釋放激抗體Human Osteoglycin 視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB)
大隱球酵母蛋白賴-6-氧化抗體Human ORC5L 視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)
糙皮側(cè)耳白酪激受體抗體Human ORC6 視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4)
中慢生華癸根瘤菌同源盒轉(zhuǎn)錄因子LMX1A抗體Human OS9 視黃結(jié)合蛋白4(RBP4)
黑曲霉轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1結(jié)合蛋白1抗體Human OSBP 視黃結(jié)合蛋白(RBP)
葡萄球菌屬狂躁基因同源蛋白MFNG抗體Human OSBPL10 食欲受體(OXR)
短芽孢桿菌E3泛蛋白連接MIB1抗體Human OSBPL11 食欲/阿立新B(OX-B)
異常威克漢姆酵母主導(dǎo)控制樣蛋白1抗體Human OSBPL2 生長(zhǎng)抑(SS)
釀酒酵母主導(dǎo)控制樣蛋白2抗體Human ORAI1 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)
沙阿霉鏈霉菌Streptomyces│zaomyceticus 質(zhì)量規(guī)格:用于亞鐵離子的測(cè)定諾林
鞘單胞菌Sphingomonas│chlorophenolica 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC)(T)檸檬苦
酵母屬Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC)(T)土木香內(nèi)酯
Aurora A抑制劑(Alisertib)北里胞 N-Boc-酪D-乳脫氫
海南根瘤 2-氨基-2',4'-二氟苯乙酮Endoglin
隆對(duì)照液 2-酰E鈣粘著蛋白;上皮性鈣黏附蛋白
隆紋黑蛋巢 四氫堿鹽鹽E選擇
福氏志賀氏 三羥甲基烷-三[3-(2-甲基吖啶基)酯]GATA結(jié)合蛋白3
釀酒酵母 1-基哌二氫GRO;KC
早熟禾鐮孢 4-環(huán)己基嗎啉III型前膠原
黃海海桿狀 1,2-二氟-3-苯IV型膠原
暗擬莖點(diǎn)霉 硝奧昔康唑IX型膠原
水堿 降烯-2,3-二羧基亞基叔丁基碳酯IκB激-β
腐皮鐮孢 4--5-羥基3(2H)-噠I型膠原
曲霉疏展變種 2-氟-4-苯肼鹽鹽I型膠原羥基端肽β降解產(chǎn)物
平臍蠕孢 3-硝基鄰苯二甲酐I型膠原羧基端前肽
鞘氨單胞 5-溴苯酞I型前膠原羧基端肽
Massilia namucuonensis 3-氟甲酯I型前膠原N端前肽
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