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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 共價(jià)CDK7抑制劑(THZ1)
貨號(hào) | FS-X10319 |
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中文名稱:共價(jià)CDK7抑制劑(THZ1)
英文名稱:THZ1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10319
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:THZ1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg THZ1是一種有效的選擇性的共價(jià)CDK7抑制劑,IC50為3.2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1604810-83-4 別名:CDK7 inhibitor 純度:98.82% 分子量:566.05 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
鮑魚側(cè)耳層粘蛋白α2抗體Human p35 水通道蛋白0(AQP-0)
冷海水黃桿菌內(nèi)皮脂肪抗體Human OXER1 雙氫睪(DHT)
短密青霉可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體Human OXCT2 衰變加速因子(DAF/CD55)
鞘單胞菌屬層粘連蛋白β2抗體Human p35 鼠嗜粒趨化因子(ECF)
錐形赤褶菇白衍生化學(xué)吸引抗體Human P4HA3 瘦受體(LeptinR)
豬丹絲菌T淋巴易位蛋白2抗體Human OXER1 瘦受體(LEPR)
越南芽孢桿菌酪磷受體相互作用蛋白Liprin α1抗體Human OTOP3 瘦(Leptin)
紅緣層孔菌線粒體離子肽1抗體Human OTOR 瘦(LEP)
平田頭菇10-4微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體Human P4HA3 受體型酪蛋白磷樣N(PTPRN)
大腸埃希菌假定腫瘤抑制亮拉鏈蛋白1抗體Human USO1(Protein USO1 homolog) 受體酪激(RTKs)
嗜乳桿菌乳脫氫LDH-C(腫瘤/抗原32)抗體Human p130Cas 受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2(RIPK2)
高盧蜜環(huán)菌腫瘤抑制基因LUCA15抗體Human p150 glued 受磷蛋白(PLN)
黑根霉淋巴特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human P15RS 嗜伊紅顆粒主要堿性蛋白(EMBP/MBP)
聚生殼菌RNA聚合相關(guān)蛋白LEO1抗體Human p19 INK4d 嗜性粒陽(yáng)離子蛋白(ECP)
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體Human ACP5(TartRate-resistant acid phosphatase type 5) 嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員3(EAR3)
沃氏富鹽菌磷化淋巴特異性蛋白酪激抗體Human OVCA2 嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員2(EAR2)
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:鋁和其他金屬等用分光光度試劑安石榴甙
耐鹽玫瑰色鮮艷菌Roseivivax│halodurans 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)羅漢果皂V
檸檬色節(jié)桿菌Arthrobacter│citreus 質(zhì)量規(guī)格:用于血液中銅的測(cè)定
共價(jià)CDK7抑制劑(THZ1)嗜乳桿 3-甲硫基CXC趨化因子配體5
地衣芽孢桿 6-喹啉-8-甲CXC趨化因子配體9
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 1,5-環(huán)辛二烯(吡啶)(三環(huán)己基磷化氫)銥六氟磷鹽CXC趨化因子受體3
麥根腐平臍蠕孢 酰CXC趨化因子受體4
釀酒酵母 2-溴-4-甲氧基-5-芐氧基苯甲C-反應(yīng)蛋白
側(cè)耳 4'-異基苯乙酮C肽
釀酒酵母 4-溴-2,3-二氟苯甲Dickkopf 1
Leucobacter aerolatus 3-羥甲基吡咯烷鹽鹽Dickkopf 1抗體
氈毛青霉 N-[4-(2-乙?;?苯基]甲磺酰Dickkopf 2
云芝栓孔(變色栓) 去甲氨噻肟乙酯DNA甲基化轉(zhuǎn)移
釀酒酵母 甘氨熊脫氧膽DNA甲基轉(zhuǎn)移1
溶桿 4-氟-3-甲氧基苯DNA甲基轉(zhuǎn)移3A
釀酒酵母 3-氨基-5-甲氧基吡啶D二聚體
蚜蟲莫氏黑粉 4-異惡唑甲D-木糖
馬德里青霉 2-甲基噻唑-4-甲乙酯D-乳
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