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規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好
用途:科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等等
產(chǎn)品名稱 | 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse nerve nutrition factor 4 (NT-4) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9952 |
備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
CM-M037小鼠小腸隱窩上皮細胞*培養(yǎng)基100mL碳酸二苯酯(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)Diphenyl Carbonate
TE-10細胞,人食管癌細胞 人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞,TG-905細胞 家貓皮膚細胞;FCA-S1二芐基亞砜(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Dibenzyl Sulfoxide
Calu-1(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2乙二醇二苯(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)Ethylene Glycol Diphenyl Ether
PTPRC Others Human 人 CD45 人細胞裂解液 (陽性對照) 十六碳酰胺(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)Hexadec*
小鼠前胃癌細胞;MFC己酮可可堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Pentoxifylline
人絨毛膜內(nèi)皮細胞西羅莫司,英文名或英文縮寫:Rapamycin,級別:BR,85%,規(guī)格:2KU
人胚腎細胞;293 Cells, low passage 人心室肌細胞*培養(yǎng)基 100mL聯(lián)本酰 Bqnzil 134-81-6
人肺成纖維細胞RNAHPF miRNA5 μg尿苷-5′-單嶙酸,英文名或英文縮寫:U 5′-P,級別:BR,98%,規(guī)格:50毫克
IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) 正十三烷,英文名或英文縮寫:Tridecane,級別:SP,98.5%,規(guī)格:5克
小香豬皮膚細胞;SSC-S2MTT 250mg/500mg/1g Amresco分裝
T-24細胞,膀胱變移細胞癌 人肺鱗癌細胞,SK-MES-1細胞 UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌YEASTEXTRACT,BACTERIOLOGICAL酵母粉細菌學(xué)級1KGRT
家貓肺細胞;FCA-L12-安基-5-基本加醋 2-cmino-5-mqthylbqnzoic ccid 941-78-8
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) metxYLCELLULOSE,4,000CENTIPOISES甲基纖維素高級1KG9004-67-5RT
CL-0370J774A.1(小鼠單核巨噬細胞)5×106cells/瓶×25-腺苷三嶙酸二鈉鹽5克RT
ART4 Others Mouse 小鼠 ART4 / CD297 人細胞裂解液 (陽性對照) 629-76-51-十五醇1-PENTADECANOL 99+%
小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa進口試劑盒人臍靜脈平滑肌細胞RNAHUVSMC miRNA5 μg己二酸二乙酯(>99.0%(GC))Diethyl Adipate質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
大鼠海馬趾星形膠質(zhì)細胞(RAh)(5×105)己二酸二異癸酯Diisodecyl Adipate質(zhì)量規(guī)格:
恒河猴腎細胞;LLC-MK2壬二酸雙(2-乙基己基)酯(>75.0%(GC))Bis(2-ethylhexyl) Azelate質(zhì)量規(guī)格:>75.0%(GC)
KM小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤瘤株;LⅡ 小鼠腎上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL己二酸二異丙酯(>99.0%(GC))Diisopropyl Adipate質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Mouse己二酸二丁酯(>99.0%(GC))Dibutyl Adipate質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
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