公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢(xún)并訂購(gòu)！

產(chǎn)品名稱(chēng)：WPB解離液說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：BJ-01R3420

規(guī)格：100ml

分類(lèi)：細(xì)胞組分分離

儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月

用途：分離植物組織細(xì)胞核

注意事項(xiàng)：主要由Tris、氯化鎂、EDTA、氯化鈉、PVP、曲拉通等組成。

注意事項(xiàng)：

1、盡注意無(wú)菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對(duì)于純凈的物質(zhì)(稱(chēng)做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱(chēng)量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線(xiàn)，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來(lái)。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對(duì)濃度有較大影響，為此，對(duì)用來(lái)直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱(chēng)量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過(guò)滴定來(lái)確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱(chēng)量和容量瓶配制，可用臺(tái)秤、量筒等器皿。將稱(chēng)好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無(wú)法準(zhǔn)確稱(chēng)量；不易得到分析純級(jí)的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來(lái)配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱(chēng)量法    用減重法精密稱(chēng)取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號(hào)的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱(chēng)取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來(lái)測(cè)定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過(guò)程稱(chēng)為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí)，就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡(jiǎn)便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱(chēng)、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Prevotella melaninogenica黑色普雷沃染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周VPS18  空泡分選蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1ml

金槍魚(yú)源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周SLN/Sarcolipin  肌脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Haemophilus influenzae流感嗜血桿LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周AKR1A1  乙醇脫1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Tobacco Necrosis Virus(TNV)煙草壞死病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-IKK beta(Ser466)  磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml

Radix asparagi天冬PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-DBC1 (Thr454)  磷酸化膀胱缺失基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Louping Ill Virus跳躍病病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Bone Sialoprotein/BSP  骨涎蛋白 0.1ml

Chryseobacterium meningsepticum腦膜炎敗血金黃桿探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-Rabbit IgM/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1ml

Radix sanguisorbae地榆探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周GRP75  G蛋白偶聯(lián)受體75抗體 規(guī)格: 0.2ml

Trichothecium spp.單端孢霉屬通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CACNA1A/Cav2.1  電壓依賴(lài)性鈣通道Cav2.1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Duck Hepatitis B Virus(DHBV)鴨乙型肝炎病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM  羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 1mg

WPB解離液說(shuō)明書(shū)乳糖莫能葡萄糖醛酸瓊脂 英文名稱(chēng)：LMG Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

Tergitol-7瓊脂 英文名稱(chēng)：Tergitol-7 Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

A1培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：A1 Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

LesEndo瓊脂 英文名稱(chēng)：m-Endo Agar，LES 產(chǎn)品規(guī)格：250g

m-TEC瓊脂 英文名稱(chēng)：m-TEC Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

現(xiàn)隱肉湯 英文名稱(chēng)：Presence Absence Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g

心浸液瓊脂 英文名稱(chēng)：Heart Infusion Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

桔汁瓊脂 英文名稱(chēng)：Orange Serum Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

EEM培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：EEM medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

胰蛋白胨膽鹽瓊脂 英文名稱(chēng)：Tryptone Bile Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線(xiàn)，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線(xiàn)的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀(guān)察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。