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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 小鼠胃腸癌標志物CA199elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse gastric cancer marker CA199ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9989 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
CL-0381MDA-MB-175VII(人導管癌細胞)5×106cells/瓶×2BOC-L-酪氨酸甲酯質量規(guī)格:>99%,BRBoc-Tyr-OMe
LIPF Others Human 人 Gasic lipase / LIPF 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-叔丁氧羰基-O-(2-溴芐氧羰基)-L-酪氨酸質量規(guī)格:>98%,BRBoc-O-(2-bromo-Cbz)-L-Tyrosine
人心肌細胞-心室總RNAHCF-av NABoc-O-叔丁基-L-酪氨酸質量規(guī)格:>98%,BRBoc-O-tert-butyl-L-tyrosine
大耳山羊腎細胞;LDG-2 皮下結締組織細胞,A9細胞 CT26.WT[CT26WT]細胞,小鼠結腸癌細胞N-CBZ-beta-丙氨酸質量規(guī)格:0.98Z-β-Ala-OH
人胚肺二倍體細胞;KMB-17CBZ-D-谷氨酸α-芐酯質量規(guī)格:>98%Z-Glu-OBzl
LAMP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP2 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-羥環(huán)己基苯酮(>98.0%(GC))質量規(guī)格:>98.0%(GC)1-Hydroxycyclohexyl Phenyl Ketone
豚鼠胚胎細胞;104C1二苯基鎓六氟1酸鹽(>97.0%(T))質量規(guī)格:>97.0%(T)Diphenyliodonium Hexafluorophosphate
AsPc-1細胞,人轉移胰腺癌細胞 人正常皮膚細胞,HaCaT細胞 小鼠T細胞;Cl.Ly1+2-/92-(4-甲氧苯基)-4,6-雙(三氯甲基) -1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))質量規(guī)格:>98.0%(GC)2-(4-Methoxyphenyl)-4,6-bis(trichloromethyl)-1,3,5-triazine
HSC-T6(大鼠肝星形細胞) 5×106cells/瓶×2三苯基溴化锍(>98.0%(T))質量規(guī)格:>98.0%(T)Triphenylsulfonium Bromide
Gibco 17101015 Collagenase Type II 1g2-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪質量規(guī)格:>98%6-Bromoimidazo[1,2-a]pyrazine
小鼠胰島細胞*培養(yǎng)基 100mLFmoc-O-叔丁基-L-蘇酸,英文名或英文縮寫:Fmoc-Thr(tBu)-OH,級別:特,98%,規(guī)格:5克
PC9人肺癌細胞 PC9 human lung cancer cells DMEM+10% FBS3,5,5-三基己醋 3,5,5-Trimqthylhqxcnoic ccid 330-10-1
IL18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-18 / IL-1F4 蛋白 (His 標簽)AGAROSESFR超高分辨率瓊脂糖生物技術級白色精細粉末RTsigma
NCTC 1469(小鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 WEHI 22.1(B細胞)梭菌蛋白酶,英文名或英文縮寫:Clostripain from Clostridium histolyticum,級別:BR,規(guī)格:100毫克
CL-0305SF-295(人XG惡性膠質瘤細胞)5×106cells/瓶×280-48-8對磺酸metxyl p-toluesulfonate
小鼠胃腸癌標志物CA199elisa進口試劑盒J82(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2 LncaP, 人前列腺癌細胞 人腦瘤細胞;SF763胡椒堿(標準品)Piperine質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人胚胎眼鞏膜成纖維細胞;HFSF紐莫康定B0(肺囊康定) Pneumocandin B0質量規(guī)格:>95%
STK40 Others Human 人 STK40 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 福莫特羅 Formoterol 質量規(guī)格:>98%
CL-0274EJ(人膀胱癌細胞)5×106cells/瓶×2溴甲后馬托品Homatropine Methyl Bromide 質量規(guī)格:BR,進口原裝
293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系 小鼠原B細胞,BA/F3細胞 Hs 181.Tes(正常人細胞)乙酸阿比特龍酯Abiraterone Acetate質量規(guī)格:>98%,細胞色素CYP17抑制劑
我司供應的elisa進口試劑盒免費代測,全程ELISA試劑盒實驗技術指導,免費代做實驗,索取產(chǎn)品說明書。
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